pcr实验室病原体测定

PCR技术的问世使病原体检测能够快速、方便地进行。由于PCR技术假阳性率太高，只要有微量病原体存在就可得到阳性结果，这并不能作为诊断依据，只有当一定数量的病原体存在时才有临床意义。因此，对模板准确定量显得特别重要，应用荧光技术PCR就能够快速、准确地得到结果。对于解决学检测的“窗口期”问题，判断***是否处于隐性或亚临床状态，以及检测不能判定是现症还是既往时，均可利用PCR进行确定。

示例：新型冠状病毒核酸检测。

方法学：荧光PCR法。

用途：用于体外定性检测新型冠状病毒的疑似病例、疑似聚集例患者、其他需要进行新型冠状病毒诊断或鉴别。

检测***：新型冠状病毒（2019-nCoV）ORFlab和N***、E***。

标本类型：上呼吸道标本：咽拭子、鼻拭子；下呼吸道标本：呼吸道抽取物、肺泡灌洗液样本、肺***活检标本。

检测流程：

（1）核酸检测前的生物安全防护（工作人员个人三级防护的穿戴）→（2）样本的灭活（56℃灭活30分钟）→（3）样本的核酸提取（手工、核酸提取仪）→（4）PCR体系的配制和模板加样→（5）上机检测及结果分析→（6）检测后的消毒。

其他病原体检测：HIV、甲乙丙肝、HPV、肺支、肺衣、EB病毒、腺病毒、胞病毒、甲乙流、埃博拉病毒、B族链球菌。

适合开展的***和：儿童***、妇幼、儿检所、第三方、各种级别的有需求的***。

pcr常见辅料的质检

辅料的质检应结合实际工作中可能用到的场景，并非越苛刻越好，需要每个实验室结合自身情况来设计和调整文中提到的参数。

1.离心管

（1）渗漏密闭性：将n个离心管加入半量墨汁，盖好盖子后放入水中，浸泡30min，没有墨汁渗出为合格。

（2）离心密闭性：将n个离心管加入半量纯水，放入离心机，10000 rpm，30min，管盖未崩开未漏液为合格。

（3）热密闭性：将n个离心管加入半量纯水，盖好盖子称重后放入金属浴中，65℃或90℃（巴氏消毒），30min，再进行称重，离心管未变形，管盖未崩开未漏液，前后重量未变化为合格。

（4）冷密闭性：将n个离心管加入半量纯水，放入-20℃冰箱，24h，离心管未变形，管盖未崩开未漏液为合格。

（5）污染物质检：将n个离心管分别加入半量阴性纯水，盖好盖子涡旋1 min后静置5min，吸取纯水作为模板进行扩增，qPCR无扩增为合格。

（6）***物质检：将n个离心管分别加入弱阳性质控物,室温静置5min，然后进行提取;RNA核酸，DNA核酸，室温静置5min，作为模板进行扩增，qPCR扩增未被***为合格。

PCR实验室通风空调设计要点

     1、温湿度

     冬季18-24℃，夏季25-28℃，湿度40-70%。

     2、空气过滤及气流***要求

     新风经热湿处理及三级(初效+中效+/亚)过滤后送入室内;各房间排风口单独设置或亚过滤器。

     当房间无工艺设备排风时，可通过换气次数(工艺操作间换气次数为12~15次/h，缓冲间6~8次/h)计算得出房间送风量，然后根据缝隙法得出房间排风量;当房间有工艺设备(如生物安全柜)排风时，比较设备排风量与满足换气次数所需送风量，取两者之间的较大值(一般情况下，设备排风量较大)，然后可根据缝隙法得出房间送风量。根据以上计算风量为设计依据，由此可对新风机组、排风机组及附属的风管风口进行选型和计算。

     气流***上，PCR实验室空调系统通常采用上送下排式的非单向流送风方式。房间上部送风口尽量均匀布置，且与生物安全柜操作面或其他有气溶胶操作地点的正上方保持一定距离;房间下部利用室内排风夹道上设置的排风口排风，排风口底部距地面0.1m，排风夹道需设置于室内被污染风险的区域，排风口前面不应有障碍物遮挡。

     3、压力控制

     在空调系统各房间送风支管上设置压力无关型定风量阀，无工艺设备排风房间的排风支管上设置压力无关型定风量阀，从而恒定房间的风量以控制房间压力;在有工艺设备排风房间的排风支管上设变风量阀，根据房间内压差动作，以控制房间压力。需排风的工艺设备(如生物安全柜)排风支管上设变风量阀，根据设备开启度调节设备排风量。