Flag标签系统是已被公认的用于表达、纯化以及检测融合蛋白的表达系统,广泛应用于Western blotting、***细胞组化、***共沉淀、流式细胞术、蛋白纯化以及蛋白相互作用、蛋白分离等多个研究领域。Flag标签是一个与重组蛋白相融合的由 8个亲水氨基酸(DYKDDDDK)组成的多肽片断。Flag标签只有8个氨基酸组成,因此它不会占据其他表位与结合域,避免导致融合蛋白的功能、分泌性以及转运发生改变。由于它的亲水性特点,Flag标签倾向于***在融合蛋白表面,因此更易与***结合以及被肠激酶酶解
如何选择合适的Flag标签***? 我们在选择Flag***时,主要根据自己的需要,特别是实验应用上的需要。另外,一个***检测后的应用类型越多,在使用过程中的选择余地就越大;而小鼠源的单******一般在特异性、稳定性以及效价都要优于多******。 另外,***的效价也是考察该***性价比的重要方面,也即相当于实际应用时的稀释比率。一个效价高的100μl Flag***(假如其WB检测的稀释比率是1:5000,***终使用液相当于500ml),要比效价低的1ml的Flag***(假如WB检测的稀释比率是 1:200,***终使用液相当于2ml)性价比更高。 EarthOx的Flag标签***不仅能应用于细胞内***的IF实验,同样还能应用于IP实验。1:200甚至更高的IP实验稀释比率,也说明了该***本身的具有很高的效价,同时,因为是单******,因此特异性也很高。***价所对应的高稀释比率也意味着高性价比。对于WB实验,其说明书的推荐起始稀释比例是1:1000,但在在1:10,000的稀释比率下也表现优异(EarthOx也进行了50,000次以后的稀释,仍然显示出很好的条带显示,没有在说明书里列出)。 一个***价的***不仅影响实验结果的灵敏度,还意味着更高的性价比。EarthOx的Flag标签***(货号#E022060)在常规的WB实验里,推荐的起始稀释比率为1:1000,实际在EarthOx的应用中,还有1:10,000甚至更高的稀释比率,需要根据客户具体的实验条件进行进行优化。
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