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木瓜蛋白酶的剪切肽键的机制包括:在His-159作用下Cys-25去质子化,而Asn-158能够帮助His-159的咪唑环的摆放,使得去质子化可以发生;然后Cys-25亲核攻击肽主链上的羰基碳,并与之共价连接形成酰基-酶中间体;接着酶与一个水分子作用,发生去酰基化,并释放肽链的羰基末端。
《GB 2760-2011 食品安全***标准 食品添加剂使用标准》规定,木瓜蛋白酶可用作食品工业在的加工助剂(酶制剂)。一般应在制成后成品之前除去(规定有残留量者除外)。[1]
木瓜蛋白酶主要用于啤酒抗寒(水解啤酒中的蛋白质,避免冷藏后引起的浑浊)、肉类软化(水解肌肉蛋白和胶原蛋白,使肉类软化)、谷类预煮的准备、水解蛋白质和肉类香料的生产。在啤酒抗寒和肉类软化方面的应用远比其他蛋白酶类广泛。用量一般为1~4mg/kg促使饼干中面筋的分解,以使成品松软。肉类软化有多种蛋白酶可用,比较如下表所列。
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胰蛋白酶的作用是使细胞间的蛋白质水解从而使细胞离散。不同的***或者细胞对胰酶的作用反应不一样。胰酶分散细胞的活性还与其浓度、温度和作用时间有关,在pH为8.0、温度为37℃时,胰酶溶液的作用能力强。使用胰酶时,应把握好浓度、温度和时间,以免消化过度造成细胞损伤。因Ca2 、Mg2 和、蛋白质可降低胰酶的活性,所以配制胰酶溶液时应选用不含Ca2 、Mg2 的BSS,如:D-Hanks液。终止消化时,可用含有培养液或者胰酶终止胰酶对细胞的作用。
1.称取胰蛋白酶:按胰蛋白酶液浓度为0.25%,用电子天平准确称取溶入小烧杯中的双蒸水(若用双蒸水需要调PH到7.2左右)或PBS(D-hanks)液中。搅拌混匀,置于4℃内过夜。
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蛋白酶广泛存在于动物内脏、植物茎叶、果实和微生物中。微生物蛋白酶,主要由霉菌、***,其次由酵母、生产。
催化蛋白质水解的酶类。种类很多,重要的有胃蛋白酶、胰蛋白酶、***蛋白酶、木瓜蛋白酶和枯草蛋白酶等。蛋白酶对所作用的反应底物有严格的选择性,一种蛋白酶仅能作用于蛋白质分子中一定的肽键,如胰蛋白酶催化水解碱性氨基酸所形成的肽键。蛋白酶分布广,主要存在于人和动物消化道中,在植物和微生物中含量丰富。由于动植物资源有限,工业上生产蛋白酶制剂主要利用枯草、栖土曲霉等微生物发酵制备。
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