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根据动物防疫法及其配套规章规定,县级动物卫生监督机构依法向屠宰场派驻(出)官i方兽医实施屠宰检疫。按照生猪屠宰检疫规程和相关规定,屠宰检疫内容包括传i染病和寄i生虫病,检疫流程包括生猪进入屠宰厂(场、点)监督查验、检疫申报、宰前检查、同步检疫、检疫结果处理以及检疫记录等。在非洲***防控期间,官i方兽医监督屠宰企业开展非洲***自检,对没有开展自检的屠宰企业,对屠宰后的生猪产品一律不得出具动物检疫证明。
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实时荧光定量PCR(real-time quantitativePCR)/QRT-PCR,是指在PCR反应体系中加入荧光标记物,利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程,***后通过扩增曲线对未知模板进行定量分析的方法。一般用于mRNA转录水平的定量研究、不同样本或***组中DNA拷贝数的测定、***芯片结果验证、药i效分析等。金开瑞采用SYBR荧光染料法及TaqMan探针法进行荧光定量PCR检测,从引物设计到检测一次性完成,提供2种常用的内参引物及免费的***数据分析,每个样品设置至少三个平行对照,保证结果的准确可靠。
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广州劢博--养猪场荧光定量PCR
荧光定量PCR技术产生并成熟于上世纪90年代,由于该技术实现了PCR从定性到定量的飞跃,能够对PCR反应的全过程进行实时监控,并且自动化程度高,所以该技术从产生到现在短短的十几年时间,在科研及检验领域获得了广泛的应用,成为分子生物学领域不可或缺的一项重要技术。荧光定量PCR技术是在PCR反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号随着PCR反应的积累来实时监控PCR反应的进程,并通过分析软件对PCR的反应进行检测分析的技术。系统组成:定量PCR仪、电脑、分析软件、***及耗材。
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进行荧光定量PCR体系的配制时***i好在冰上进行,操作环境不用非得在超净台中进行,环境安静整洁都可以。因为每一个梯度要做三个重复,因此先在1ml的无菌离心管中配制好后再分装入96孔板中。实验中我使用过荧光定量八联管和96孔板,个人推荐96孔板。因为八联管你需要盖上盖子,而且盖子比较的难按下去,稍不慎就把八联管弄断或者液体撒出来。有的时候一下忘记了是从哪边开始的。96孔板比较方便,加完样品后只需附上一层膜,用它自带的板子抚平即可。上机器前***i好离心一下,让贴在管壁上的液体流下来同时也消掉气泡。
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随着定量PCR仪设计上的不断改进,对温度控制的精密性越来越高,出现了像Rotor-Gene这样的管间温度均一性达±0.01℃的定量PCR仪,而该公司新近推出的Rotor-Gene6000更可达到±0.02℃的温度分辨率。温度上的高分辨率使得运用定量PCR仪进行高分辨率熔解曲线(HRM)分析***型成为可能。高分辨率熔解曲线根据序列长度、GC含量和互补性分析样品。不同的核酸序列,哪怕仅有一个碱基的差异,也会体现在熔解温度的差别上。
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PCR是1985年开始出现的一项***检测技术,由于PCR技术具有简便易行、灵敏度高等优点,该技术被广泛应用于基础研究,养殖场核酸提取纯化,成为分子生物学必不可少的研究工具。但在许多情况下,研究者们已不再满足于得知某一特异DNA序列的存在与否,他们更着眼于对其进行精i确的核酸定量。因而,借助PCR对***快速、敏感、特异而准确的定量成为目前分子生物学技术研究的热点之一。实时荧光定量PCR( real-time quantitative PCR, RQ PCR)技术实现了PCR从定性到定量的飞跃,它以其特异性强、灵敏度高、重复性好、定量准确、速度快、全封闭反应等优点成为分子生物学研究中的重要工具。
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