广州劢博仪器有限公司产品服务包括：非洲病毒检测、核酸提取纯化、PCR、荧光定量PCR、检测、非洲检测、全自动核酸提取纯化系统、病毒核酸提取系统、非洲病毒快速检测***盒。我们的客户对象是食品企业/公司/厂、食品加工企业/公司/厂、冷冻食品加工企业/公司/厂、养殖场、养猪场、屠宰场、生猪屠宰场。从20世纪60和70年代i开始ASF由非洲蔓延至欧美地区，2007年格鲁吉亚、亚美尼亚、阿塞拜疆和俄罗斯都出现了大面积流行，2018年8月也开始在我国快速蔓延开来，对我国养猪业的持续稳定发展构成巨大威胁。

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在real-time Q-PCR技术中，无论是相对定量还是标准曲线定量方法仍存在一些PCR定量方法均有的问题有待解决。在标准曲线定量中，标准品的制备是一个必不可少的过程。目前由于无一统一标准，各个实验室所用的生成标准曲线的样品各不相同，致使实验结果缺乏可比性。此外，用real-time Q-PCR来研究mRNA时，受到不同RNA样本存在不同的逆转录（RT）效率的限制。环境监测在人类食品和宠物食品行业已经成为常规举措，可以帮助人们发现生物安全计划中的薄弱环节。在相对定量中，其前提是假设内源控制物不受实验条件的影响的，合理地选择合适的不受实验条件影响的内源控制物也是实验结果可靠与否的关键。

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与传统的PCR技术相比，Real-time Q-PCR的不足之处是：（1）由于运用了封闭的检测，减少了扩增后电泳的检测步骤，因此也就不能监测扩增产物的大小；（2）因为荧光素种类以及检测光源的局限性，从而相对地限制了real-time Q-PCR的复合式（multiplex）检测的应用能力；在相对定量中，其前提是假设内源控制物不受实验条件的影响的，合理地选择合适的不受实验条件影响的内源控制物也是实验结果可靠与否的关键。（3）目前real-time Q-PCR实验成本比较高，从而也限制了其广泛的应用。

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非洲为何难以控制？温度上的高分辨率使得运用定量PCR仪进行高分辨率熔解曲线（HRM）分析***型成为可能。非洲病毒***组全长 170～190 kb，为有囊膜的双链 DNA 病毒，病毒粒子大小为 175～215 nm，呈正二十面体结构，也是唯i一的虫媒DNA病毒。非洲病毒是一种急性、热性、高度接触性传i染病，引起猪的死i亡率可达100％，并且非洲具有潜伏期，即使感i染病毒，但没有临床症状，就有可能通过非实验室检验技术关卡流入市场，进而导致下游食品企业相关问题的出现。

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非洲与传统相似且综合症状复杂难辨，临床上类似于急性，表现为高热、皮肤充血、流i产、水肿和脏器出血。我国因之前不属于非洲i疫情***，因此没有相关的针对性研究，目前采用的是原农i业部检疫所于1997年与美国梅岛动物病研究所共同研究的检测方法，主要是PCR和ELISA，标准遵循GB/T 18648-2002非洲诊断技术。随着相关检测技术的发展，对于非洲的检测方法也更加完善。PCR技术是目前i简单、快速的分子学检测方法，但该方法的敏***有限，因此以PCR为基础的更新方法应运而生。广州劢博--博日养猪场全自动核酸提取纯化系统实时荧光定量PCR的基本原理：理论上，PCR过程是按照2n（n代表PCR循环的次数）指数的方式进行模板的扩增。

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定量PCR已经从基于凝胶的低通量分析发展到高通量的荧光分析技术，即实时定量PCR。实时荧光定量PCR技术于1996年由美国Applied Biosystems公司推出，由于该技术不仅实现了PCR从定性到定量的飞跃，而且与常规PCR相比，它具有特异性更强、有效解决PCR污染问题、自动化程度高等特点。实时定量PCR (real-time quantitative PCR)是指在PCR指数扩增期间通过连续监测荧光信号强弱的变化来即时测定特异性产物的量，并据此推断目的***的初始量，不需要取出PCR产物进行分离。还有的在入舍消毒池中，只是例行把水和火碱放进去，也不搅拌，火碱靠自身溶解需要较长时间，那刚放好的消毒水的作用就不确实了。

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PCR扩增时在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针，该探针为一寡核苷酸，两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收；猪群一旦出现不吃料、减料、轻微发热等疑似发病症状，可立即采集猪的唾液、肛肠拭子等混检，有助于疫情的提早发现。PCR扩增时，Taq酶的5’-3’外切酶活性将探针酶切降解，使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离，从而荧光监测系统可接收到荧光信号，即每扩增一条DNA链，就有一个荧光分子形成，实现了荧光信号的累积与PCR产物形成完全同步.

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传统的PCR定量是应用终点PCR来对样品中的模板量进行定量,通常用凝胶电泳分离,并用荧光染色来检测PCR反应的终扩增产物。但在PCR反应中,由于模板、***、焦磷酸盐分子的聚集等因素影响聚合酶反应,终导致PCR反应不再以指数形式进行而进入“平台期”,而且一些反应的终产物比另一些要多,因此终点PCR反应方法定量并不准确。此外,终点PCR还容易交叉污染,产生假阳性。96孔板比较方便，加完样品后只需附上一层膜，用它自带的板子抚平即可。

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核酸提取仪原理是，经裂解液裂解后，细胞核中会释放出核酸分子，会被吸附在磁珠表面，而蛋白质等物质不会被吸附，结合了核酸的磁珠被磁性物质固定在管壁上转移到洗脱管中，经过反复洗脱，后我们可以得到纯净的DNA。根据其使用范围可以分为两类，一种是大型核酸提取仪，另一种是小型核酸提取仪；在real-time技术的发展过程中，两个重要的发现起着关键的作用：（1）在90年代早期，TaqDNA多聚酶的5′核酸外切酶活性的发现，它能降解特异性荧光记探针，因此使得间接的检测PCR产物成为可能。主要是利用磁珠纯化核酸及蛋白质从而达到提取核酸的目的，在细胞、动植物***等研究方面，一个样品用一个探针，有效防止样品之间的交叉污染。