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PCR反应过程中产生的DNA拷贝数是呈指数方式增加的，随着反应循环数的增加，***终PCR反应不再以指数方式生成模板，从而进入平台期。在传统的PCR中，常用凝胶电泳分离并用荧光染色来检测PCR反应的***终扩增产物，因此用此终点法对PCR产物定量存在不可靠之处。在real-time Q-PCR中，对整个PCR反应扩增过程进行了实时的监测和连续地分析扩增相关的荧光信号，随着反应时间的进行，监测到的荧光信号的变化可以绘制成一条曲线。广州劢博--屠宰场荧光定量PCR扩增序列特异性检测方法是在PCR反应中利用标记荧光染料的***特异寡核苷酸探针来检测产物，它又可分为直接法和间接法。

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在PCR反应早期，产生荧光的水平不能与背景明显地区别，而后荧光的产生进入指数期、线性期和***终的平台期，因此可以在PCR反应处于指数期的某一点上来检测PCR产物的量，并且由此来推断模板***i初的含量。为了便于对所检测样本进行比较，在real-time Q-PCR反应的指数期，首先需设定一定荧光信号的域值，一般这个域值（threshold）是以PCR反应的前15个循环的荧光信号作为荧光本底信号（baseline），荧光域值的缺省设置是3～15个循环的荧光信号的标准偏差的10倍。②操作简单、用时短，整个提取流程只有四步，大多可以在36-40分钟内完成。

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一般而言，荧光扩增曲线可以分成三个阶段：荧光背景信号阶段，荧光信号指数扩增阶段和平台期。在荧光背景信号阶段，扩增的荧光信号被荧光背景信号所掩盖， 无法判断产物量的变化。而在平台期，扩增产物已不再呈指数级的增加，PCR 的终产物量与起始模板量之间没有线性关系，根据***终的 PCR 产物量也不能计算出起始 DNA 拷贝数。相对定量分析以实时PCR方式执行，在实时PCR分析过程中，PCR***扩增一直在监控中，在PCR进行期间进行数据采集，而不是在PCR结束时（终点PCR）才获取数据。只有在荧光信号指数扩增阶段， PCR产物量的对数值与起始模板量之间存在线性关系，我们可以选择在这个阶段进行定量分析。为了定量和比较的方便，在实时荧光定量 PCR 技术中引入了两个非常重要的概念：荧光阈值和 CT值.

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什么是荧光定量PCR？常规PCR中，扩增产物（扩增子）是通过终点法来分析检测，即PCR反应结束后，DNA通过琼脂糖凝胶电泳，然后进行成像分析。而荧光定量PCR可以在反应进行过程中进行累积扩增产物的分析和检测，即“实时”。在反应体系中加入荧光分子，通过荧光信号的按比例增加来反应DNA量的增加，使PCR产物的实时检测成为可能。满足实验目的的荧光化学物质包括DNA结合染料和荧光标记的序列特异引物或探针；专门的热循环仪配备荧光检测模块，用于监测扩增时的荧光，检测到的荧光信号反映了每个循环扩增产物的量。而在平台期，扩增产物已不再呈指数级的增加，PCR的终产物量与起始模板量之间没有线性关系，根据***终的PCR产物量也不能计算出起始DNA拷贝数。

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非洲***（African Swine fever，ASF）是由非洲***病毒（African Swine fever virus，ASFV）感i染家猪和各种野猪（非洲野猪、欧洲野猪等）引起一种急性、出i血性、烈性传i染病。世界动物卫生***（OIE）将其列为法定报告动物疫病，该病也是我国防范的一类动物疫情。广州劢博--屠宰场荧光定量PCR磁珠法核酸提取，具有传统DNA提取方法无法比拟的优势，主要体现在：①能够实现自动化、大批量操作，符合生物学高通量的操作要求，使得传i染性***爆发时能够进行快速及时的应对，这一特点使得传统方法望尘莫及。其特征是发病过程短，***急性和急性i感i染死i亡率高达100%，临床表现为发热（达40~42℃），心跳加快，呼吸困难，部分咳嗽，眼、鼻有浆液性或粘液性脓性分泌物，皮肤发绀，淋巴i结、肾、胃肠粘膜明显出血，非洲***临床症状与***症状相似，只能依靠实验室监测确诊。

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非洲***是一种传i染性强，危害严重的猪感i染病毒性***。非洲***病毒（ASFV）通过直接或间接接触传播，在猪群众传播速度极快。而且，该病毒在未经烹饪的生猪相关制品中存活时间很长，这一特点使得非洲***容易向未感i染区域传播。由于非洲***可以感i染野猪，而软蜱通过叮咬野猪成为非洲***主要传播途径之一，这也给非洲***的净化带来难度。复检为阳性的，企业要在当地市场监管、畜牧兽医部门监督下，按规定对同批次生猪产品原料进行无害化处理，对相关场所进行彻i底清洗消毒。非洲***的感i染致死率极高，接近100%，并且目前没有有效的疫i苗和治i疗手段。PCR技术在传i染病诊断上具有广泛的应用，该技术灵敏度高，特异性强，能够在猪、猪产品及环境中病毒的“踪迹”进行有效的监控，是农业农村部指i定的非洲***首i选诊断技术。