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常用生物指示剂

（1）湿热灭菌法：湿热灭菌法***常用的生物指示剂为嗜热脂肪芽孢***孢子（SporesofBacillusstearothermophilus，如NCTC10007、NCIMB8157、ATCC7953）。D值为1.5～3.0min，每片（或每瓶）活孢子数5×105～5×106个，在121℃、19min下应被完全杀灭。此外，还可使用生孢梭菌孢子（SporesofClostridiumsporogenes如NCTC8594、NCIMB8053、 ATCC7955），D值为0.4～0.8min.

（2）干热灭菌法：干热灭菌法***常用的生物指示剂为枯草芽孢***孢子（SporesofBacillussubtilis，如NCIMB8058、ATCC9372）。D值大于1.5min，每片活孢子数5×105～5×106个。去热原验证时使用大肠***内毒r素（Escherichiacoliendoxin），加量不小 于1000***内毒r素单位。

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菌株应用适宜的培养基（如产孢子的培养基）进行培养。培养物应制成悬浮液，其中孢 子的数量应占优势，孢子应悬浮于无营养的液体中保存。生物指示剂中包含一定数量的一种或多种孢子，可制成多种形式，通常是将一定数量的孢子附着在无生命的载体上，雅马拓，如滤纸条、玻片、不锈钢、塑料制品等；孢子悬浮液也可密封于安瓿中；有的生物指示剂还配有培养基系统。生物指示剂应选用合适的材料包装并设定有效期。载体和包装材料在保护生物指示剂不被污染和损耗的同时，还应保证灭菌剂穿透并能与生物指示剂充分接触载体和包装应设计原则是便于贮存、运输、取样、转移接种。

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生物指示剂系一类特殊的活微生物制品。可用于确认灭菌设备的性能、灭菌程序的验证、 生产过程灭菌效果的监控等。用于灭菌验证中的生物指示剂一般是***的孢子。

1.制备生物指示剂用微生物的基本要求 不同的灭菌方法使用不同的生物指示剂，制备生物指示剂所选用的微生物必须具备以下 特性：

（1）***的耐受性应大于需灭菌产品中所有可能污染微生物的耐受性。

（2）***应无致病性。

（3）菌株应稳定。存活期长，易于保存。

（4）易于培养。若使用休眠孢子，生物指示剂中休眠孢子含量要在90%以上。生物指示剂的制备：生物指示剂的制备应按一定的程序进行，制备前，需先确定所用微生物的特性，如D值（微生物的耐热参数，系指一定温度下，将微生物杀灭90%所需的时间，以分表示）值 等。

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