******化学(简称***组化)是利用***反应来******或细胞中某些抗原成分的存在和分布的一门技术。将荧光素或酶标记***与***切片中的相应抗原结合,在荧光******处可发出荧光,用荧光显微镜可检出抗原物质所处的部位;酶标记的***通过底物的显色反应,用普通光学显微镜可对被测抗原物质定性或准确***。
当前******化学技术中用来检测***(包括******内抗原的***已达数千种,依据制备***的不同技术可将***分成多******和单******两大类:
①多******的效价较高、制备较方便,故价格低廉,而且大多可用于常规石蜡切片标记。但缺点是易发生非特异交叉反应,目前可采用优选蛋白氨基酸多肽片断加以解决。
②单******的特异性高,质量和效价稳定.缺点是价格较贵,有些单******只能用新鲜标本冰冻切片标记,使用受到一定限制。两类***各有利弊,可酌情选用。
***组化的应用是***病理诊断技术的一次飞跃,它将形态学观察和抗原***反应的特异性以及***标记技术的敏***相结合,可以在***原位显示***所含的抗原成分,用于***诊断和鉴别诊断、病因和病变机理的研究。
目前比较常用的***组化方法是PAP法(辣根过氧化物酶-抗辣根过氧化物酶法)和ABC法(卵白素-生物素法),而ABC法更为常用。ABC法是利用蛋清中提取的一种糖蛋白-亲和素(A)能与4个生物素(B)结合的能力,用2种***逐级放大。******(Ab1)与***中的待测抗原结合,第二***是生物素标记的兔抗鼠Ig(Ab2),能与Ab1结合,然后加入酶标记的亲和素,再加底物显色,形成Ag-Ab1-Ab2-B-A-酶-底物的反应模式,可对待测抗原进行定性和***。
******化学技术在***病理诊断上主要用于:
①分化差******的诊断和鉴别诊断;
②******的诊断、鉴别诊断和功能分类;
③证实******和*********;
④应用***胚胎性***素原诊断某些***,如高胚抗原(CEA)对胃肠道***、甲胎蛋白(AFP)对肝***和***内胚窦***诊断有帮助;
⑤确定同一***中的多种成分;
⑥有时可帮助确定***的良***,如应用***球蛋白轻链κ和λ来鉴别滤泡性******和滤泡性反应性***;
⑦研究***来源不明的***;
⑧研究某些***症与病毒的关系,如肝***与乙型***病毒、鼻咽***与EB病毒、******与***状瘤病毒等的关系;
⑨为******的选择提供依据,如******检测雌、孕***受体(ER、PR)呈阳性时,应用他莫昔芬(三苯氧胺)***可预期获得较好的***;
⑩检测******和抑******蛋白产物(如c-erbB2,p53)、***活性抗原(如Ki-67,PCNA)用来估计***的预后。
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