为了使产生的***获得***佳效果,仔细地设计抗原多肽是很有必要的,设计应满足一个基本条件:在***过程中,该抗原既不会产生过强的***反应,同时又能产生出对感兴趣的蛋白有结合能力的***。抗原设计是一个很复杂的课题,有诸多需要注意的细节。根据我们所积累的经验,有几点关键的基本设计原则可供大家参考:
确定***的用途
新开展一个研究项目,弄清楚所感兴趣的蛋白的一些基本特性是很有必要的,特别是如果知道蛋白的结构会对选择***易于接触和识别的区域有很大的帮助。然而,在没有这样***的结构信息的情况下,了解研究的用途会影响多肽设计的策略。例如:如果研究***是集中在蛋白的不同区域,如C端或N端,或在一种特定状态下的蛋白,如磷酸化等,那么按照所需序列设计的多肽和产生的相应的***在应用上应该没有太大的困难,然而,蛋白的构象将影响***与其识别区域之间的相互作用。这种情况下可能存在的问题是如果在折叠的蛋白中,该识别区域被藏在蛋白的内部,***将无法接触到该区域,则无法产生相互作用。
识别区域的选择原则
一般说来***理想的抗原识别区域应具备亲水、位于蛋白表面和结构上易变形性等特点。因为在大多数的天然环境中,亲水区域倾向于集中在蛋白表面,而疏水区域常常被包裹在蛋白内部,同样道理,***只能与在蛋白表面发现的识别区域相互作用,而当这些识别区域有足够的结构易变形性而转移到***可接触的位置时,将会与***间有很高的亲和性。
连续的与不连续的识别区域
连续的区域是指由连续的氨基酸序列构成的识别区域。大多数***是针对连续识别区域的,***能与这类区域以很高的亲和力相结合表明这段序列不在蛋白内部。不连续的识别区域是代表有一定折叠的一段多肽序列,或是将两段分离开的多肽连在一起的***的识别区域。在某些情况下,针对这样不连续识别区域的***也能产生,只是用来***的抗原多肽必须具备与该不连续识别区域相似的二级结构,而序列的长度需要符合相关的要求。
基本建议
为了避免识别区域隐藏在蛋白内部的风险,我们通常建议选择蛋白的N,C两端来产生的相应的***。因为在完整的蛋白中,N,C两端通常是暴露在蛋白表面的。然而,一定要注意膜蛋白的C端疏水性太强,不适合作为抗原。
序列的长度
通常我们建议抗原多肽的序列长度在8-20个氨基酸残基之间,如果太短,就有多肽特异性不强、所产生的***与天然蛋白之间的结合能力不够强的风险;但是,如果序列长度超过20,将有可能引入二级结构,所产生的***失去特异性的可能,而且肽链越长,通常合成难度增大,不易获得高纯度的产品。
载体蛋白交联的选择
将载体蛋白加在远离***识别区域的一端,在序列中没有Cys的情况下在N或C端加上Cys为交联的***方法。
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