测定氨基酸的方法很多,仅用于反相***液相色谱(RP-HPLC)检测氨基酸的柱前衍生***就有近10种。在Koop等和Bidling-meyer等证明异硫***酸苯酯(PITC)和氨基酸的反应产物******盐(PTC)-氨基酸的稳定性后,PITC才直接用于氨基酸分析。这种方法的优点是PITC与氨基酸和亚氨基酸均能反应。该法是目前氨基酸分析中具有吸引力的分析方法之一。

目前常用的异硫***酸苯酯柱前衍生测定氨基酸方法是在室温下进行衍生反应,然后进行两次快速蒸发干燥(以除去干扰因素),将残留物溶解过滤后再进行色谱分析。相关研究人员对其实验过程进行了改进,不用常规的两次蒸发,仅以正己烷除去干扰因素,过滤后直接进样分析,从而简化了实验步骤,既节约了时间,又降低了费用。

将该方法应用于测定含无机离子及小分子肽(相对分子质量小于5000)、氨基酸、核苷酸、低聚糖、脂类等小分子有机物的小牛血去蛋白***液中的游离氨基酸,结果令人满意。

 仪器与***

***液相色谱仪,超声波清洗器,石英亚沸高纯水蒸馏器。

检测时 色谱条件

C18色谱柱(5μm,200mm×4.6mmi.d.),柱温38℃;检测波长254nm;进样量1μL～10μL。

流动相A:0.1mol/L***-***(体积比为97∶3)溶液;流动相B:***-水(体积比为4∶1)溶液。

线性梯度洗脱程序:0.0min,0%B;13min,7%B;23min,23%B;29min,35%B;35min, 40%B;40min,100%B;45min,100%B;47min,0%B。流动相流速1.0mL/min。

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