分别用70%乙醇和灭菌蒸馏水清洗金粉(直径为1 μm),加入灭菌蒸馏水制成金粉悬浮液,取100 μL 放在含有1.0 cm2 洋葱表皮的玻璃皿中,边振荡边加入10 μL pCambia2301-GaMYB2-GFP质粒,逐步加入40 μL 0.1 mol·L-1 亚精胺和100 μL2.5 mol·L-1 C***2,振荡混匀。***枪GDS-80轰击时氦气罐的气压为1 300 psi,取10 μL DNA 包裹好的微粒悬浮液加到***枪***,亚细胞***服务,进行轰击,之后放置25℃避光过夜培养,使用ConfocalLaser激光共聚焦显微镜观察。
原理:构建编码目bai标蛋白和荧光蛋du白的融合蛋白的载体,转染细胞,表zhi达,然后激光共聚焦显微镜dao观察荧光信号所在位置,即可知道该蛋白的亚细胞***。注意做空载荧光蛋白的对照。
具体步骤:构建目标蛋白与GFP的融合蛋白的瞬时表达载体,***枪轰击洋葱内表皮细胞,或化学(PEG)转化原生质体,瞬时表达后用荧光显微镜观察荧光位置,当然激光共聚焦图片会更漂亮。
而在对细胞内不同隔室间信号传递的分析中发现,大型细胞隔室的作用非常突出,特别是跟分泌途径相关,或者不同隔室之间信号传递有关。蛋白组数据及基于的荧光成像技术,为人类细胞的亚细胞结构***提供了目前为止为的综合性数据。上述结果收录在The Cell Atlas中,成为人类蛋白组计划(Human Protein Atlas)框架内的重要组成部分。
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