1)将融合***(待测植物蛋白质***-报告***)***到植物表达载体,得到重组表达载体;2)将重组表达载体转化农,得到重组农;蛋白分布在不同的细胞的不同部位,对蛋白的亚细胞***分析可以有助于蛋白功能研究的初步判断,目前存在两种方法,其一为软件预测,其二通过实验验证。3)向重组农中加入农侵染缓冲液,调节OD600为0.1~0.3,20-25℃静置1-2h,得到侵染菌液;4)用针头在植物叶片上避开叶脉扎孔,用无针头将侵染菌液从扎孔处***至植物叶片内;5)培养植物2天,从***部位取1-2cm2叶片;根据报告***检测待测植物蛋白质在植物中的亚细胞***。实验证明,本方法具操作简单、快速、标记效果好、重复性好的优点;还可用于***表达调控及内含子功能研究等,对研究新***功能和表达调控奠定了技术基础。
亚细胞***是指某种蛋白或某个***表达产物在细胞内的具体存在部位,包括细胞核、细胞质和细胞膜等部位。传统的实验方法有,利用一些荧光蛋白如GFP、YFP,通过其在激光照射下发出的绿色或***荧光,从而准确确定编码蛋白的***。在此阶段每分子磷酸丙糖可生成1分子NADH H 和2分子ATP,ATP由底物水平磷酸化产生。如果面对质谱打出来很多蛋白,传统的实验方法显得十分乏力。如果能利用生物信息学手段基于一些算法如机器学习等开发的方法进行亚细胞***预测分析辅助于实验,这样就能省时省力节约成本。
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