4、客户需要提供的信息:
4.1、目标***ORF
4.2、***名称等注释信息,如果特别要求请在备注中注明。
4.3、如果不是我公司代为构建载体,客户需提供质粒(质粒浓度为gt;200ng/ul)以及菌液各一份。注明菌液抗性,荧光蛋白的颜色或者激发光和发射光波长。亚细胞***
真核细胞有许多***功能的膜结构组件,蛋白质活性和亚细胞***的动态调节是许多细胞过程的需要。进而促进了人类细胞图谱(HumanCellAtlas)项目的大胆落实。光具有高空间及时间分辨率,被广泛用于外部触发生物调节。蛋白质可通过融合感光体获得光敏方向性,但这种耗时、复杂的***编辑过程可能会扰乱正常细胞通路,改变蛋白功能和行为。因此需要更小影响蛋白质功能的策略实现蛋白的准确控制。适配体具有优异的分子识别能力,并且方便修饰,设计灵活。本文中作者发展了基于适配体的光响应纳米平台,并选择转录因子RelA作为实验对象,一种适配体Apt可高结合活性、特异性识别RelA。
原理:构建编码目bai标蛋白和荧光蛋du白的融合蛋白的载体,转染细胞,表zhi达,然后激光共聚焦显微镜dao观察荧光信号所在位置,即可知道该蛋白的亚细胞***。注意做空载荧光蛋白的对照。
具体步骤:构建目标蛋白与GFP的融合蛋白的瞬时表达载体,***枪轰击洋葱内表皮细胞,或化学(PEG)转化原生质体,瞬时表达后用荧光显微镜观察荧光位置,当然激光共聚焦图片会更漂亮。
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