武汉迈斯普生物科技有限公司是一家***从事生物***技术服务、技术咨询及产品开发的生物技术服务企业。公司坐落于武汉光谷，由3位归国博士领衔创办。公司长期致力于建立并完善多项基础生物技术服务平台。现凭借自身技术特色，依托光谷生物城技术产业优势，面向***提供的生物技术服务。在酵母双杂交系统中，“诱饵”蛋白X至DNA-BD载体中，表达DNA-BD/X融合蛋白。


原位杂交：在研究DNA分子原理的基础上发展起来的一种技术。其基本原理是两条核苷酸单链片段，在适宜的条件下，能过氢键结合，形成DNA-DNA、DNA-RNA或 RNA-RNA 双键分子的特点，应用带有标记的（有性同位素，如3H、35S、32P、荧光素生物素、等非性物质）DNA或RNA片段作为核酸探针，与***切片或细胞内待测核酸（RNA或DNA）片段进行杂交，然后可用自显影等方法予以显示，在光镜或电镜下观察目的 mRNA或DNA 的存在并***；用原位杂交技术，可在原位研究细胞合成某种多肽或蛋白质的***表达。此方法有很高的敏***和特异性，可进一步从分子水平来探讨细胞的功能表达及其调节机制。已成为当今细胞生物学、分子生物学研究的重要手段。

武汉迈斯普生物科技有限公司是一家***从事生物***技术服务、技术咨询及产品开发的生物技术服务企业。公司坐落于武汉光谷，由3位归国博士领衔创办。公司长期致力于建立并完善多项基础生物技术服务平台。一旦X与Y蛋白间有相互作用，则DNA-BD和AD也随之被牵拉靠近，***行使功能，报告重组体中LacZ和HIS3***的表达。现凭借自身技术特色，依托光谷生物城技术产业优势，面向***提供的生物技术服务。

单独的BD虽然能和启动子结合，但是不能转录。而不同转录因子的BD和AD形成的杂合蛋白仍然具有正常的转录的功能。如酵母细胞的Gal4蛋白的BD与大肠的一个酸性结构域B42融合得到的杂合蛋白仍然可结合到Gal4结合位点并转录。

原位杂交的应用

①细胞特异性mRNA 转录的***，可?于***图谱，***表达和***组进化的研究。

②感1染***中病毒DNA/RNA 的检测和***，如EB 病毒mRNA、?类乳1头状瘤病毒和巨细胞病毒DNA 的检测。

③******、抑******及各种功能***在转录?平的表达及其变化的检测。

④***在染?体上的***。

⑤检测染?体的变化，如染?体数量异常和染?体易位等。

⑥分裂间期细胞遗传学的研究，如遗传病的产前诊断和某些遗传病***携带者的确定，某些肿1瘤的诊断和?物学剂量测定等。

原位杂交在前。

（1）常规脱蜡入水。

（2）37℃蛋白酶K消化20min，37℃漂洗液充分洗去蛋白酶K。

（3）滴加探针，加盖玻片，避光、湿盒、37℃过夜孵育。

（4）如果***盒允许的话，将***盒中洗脱液水浴加温至37℃震荡洗脱多余的探针。

（5）加碱性磷酸酶标记的抗1体，37℃孵育半小时，洗去抗1体后显色。

免1疫组化在后。

（1）将显色后确认为阳性的切片充分漂洗。

（2）在PH为6.0的枸橼酸钠溶液中，微波至96℃左右，作用10min。

（3）滴加一抗，37℃湿盒孵育2h。

（4）充分漂洗切片，滴加二抗，室温下孵育40-50min。

（5）DAB显色后，采用PBS中止显色反应。

（6）不要复染核，不然就盖住原位杂交信号了。