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RNase处理:在DNA-DNA杂交实验中,RNase的处理可去除内源性RNA,增加实验的信噪比。在进行mRNA为靶标的检测时,病毒原位杂交电话,RNase处理的样品也可作为质控对照。通常的处理方式是将DNase-free的RNase溶解于2×*** (100μg/ml),荧光原位杂交技术服务,样品在溶液中37℃处理60min。
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尤其在***分析和诊断方面能作定性、***和定量分析,已 成为的分子病理学技术,原位杂交,同时在分析低丰度和罕见的mRNA表达方面已展示了分子生物学的一重要方向。FISH是原位杂交技术大家族中的一员,因其所用探针被荧光物质标记(间接或直接)而得名,该方法在80年代末 被发明,现已从实验室逐步进入临床诊断领域。基本原理是荧光标记的核酸探针在变性后与已变性的靶核酸在退火 温度下复性;通过荧光显微镜观察荧光信号可在不改变被分析对象(即维持其原位)的前提下对靶核酸进行分析。
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内源性酶灭活:如果探针的检测是通过酶促法进行的,则样品内相应的内源性酶必须被灭活。如内源性的POD可通过含1% H2O2的甲醛溶液处理30min。
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