随着柱填料的快速发展,反相色谱法的应用范围逐渐扩大,现已应用于某些无机样品或易解离样品的分析。为控制样品在分析过程的解离,常用缓冲液控制流动相的pH值。但需要注意的是,C18和C8使用的pH值通常为2.5~7.5(2~8),太高的pH值会使硅胶溶解,太低的pH值会使键合的脱落。有报告新商品柱可在pH 1.5~10范围操作。
正相色谱法与反相色谱法比较表
正相色谱法 反相色谱法
固定相极性 高~中 中~低
流动相极性 低~中 中~高
组分洗脱次序 极性小先洗出 极性大先洗出
堵”的原因之一:纯水中的***污染首先我们要认识到,一般的国产甲1醇其实不需要额外过滤处理,直接使用没有问题。即使是有些固态微粒杂质,也能在液相流路系统的过滤头上排除,真正容易引起问题的,是水中的***。新制备的纯水在室内放置几天就会长菌,而这些***虽然肉眼不可见,却足以堵塞柱填料颗粒的空隙,造成柱子很快报废。这就是在配制流动相时造成的***污染的原因,解决它的方法很简单,就是确保水的可靠性。
有两种方式推荐:
(1)的方式当然是购买实验室专用纯水机,既方便又可靠,质量也放心。缺点就是价格不菲。
(2)成箱购买市售纯净水,这些水的质量足以应付液相色谱的要求。先随机抽取一支做一下***平板实验,待菌落数合格方可使用。这样每次只要单独开一支即可,也很方便。每次成本2元左右。这里特别指出一个细节:在绝大多数书本上,凡谈到配制流动相都会谈到后一个过滤的步骤。但是从我们长期使用的实际效果来说,只要能保证水的质量,这一步完全可以也应当去除。
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