分离与纯化技术
提取:又称浸出、固液萃取,是应用有机或无机溶剂将固体原料中的可溶性组分溶解,使其进入液相,再将不溶性固体和溶液分开的操作。影响因素:粉碎度,提取温度,浓度差,提取时间。
萃取:两相溶剂提取又简称萃取法,是利用混合物中各成分在两种互不相溶的溶剂中分配系数的不同进行分离的方法。
微波提取:是利用微波能进行物质萃取的一种新发展起来的技术。原理:由于物质分子偶极振动同微博振动具有相似的频率,在快速振动的微波磁场中,被辐射的极性物质分子吸收电磁能,以每秒数十亿次的高速振动而产生热能。
特点:***少、设备简单、适用范围广、重现性好、选择性高、操作时间短、溶剂耗量少、有效成分得率高、不产生噪音、不产生污染、适于热不稳定性物质。
反相层析在吸附层析中,性物质在层析柱上吸附较牢,洗脱时发生拖尾现象和保留时间长的问题。如果在支持物上涂上一层高碳原子的疏水性强的烷烃类,洗脱液用极性强的溶剂,如和水的混合物。则被分离样品中的极性强的物质不被吸附,洗下来,得到较好的分离效果。这种层析法与普通的吸附层析法相反,故称为反相层析。用HPLC做反相层析常用的ODS柱,即在支持物的表面上连接了C18H37Si—基团。
同系层析在核酸分析中,将样品经核酸酶部分裂解成不同长度的核苷酸片段,用同位素标记后,在DEAE纤维素薄层上分离,用含有未标记的相同的核苷酸片段作展层溶剂,这样,未标记的核苷酸把标记过的核苷酸推进,使按分子量大小不同把标记核苷酸片段,按由小到大的次序排列,达到分离的目的。于是把这种层析法称为同系层析。同系层析和电泳相结合曾用于寡核苷酸的顺序分析。
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