武汉思特进科技发展有限公司成立于2007年,是一家以实验技术研发、实验产品研发、日化产品研发、实验项目承接为一体的高新技术公司;公司实验中心有分子生物学平台、细胞平台、光镜平台、植物组培平台、原核蛋白表达平台、日化产品生产平台;可以开展各类动、植物、***、细胞等生物实验。目的探讨荧光原位杂交技术(fluorescenceinsftuhybridization,FISH)在复杂染色体异常产前诊断中的应用价值。
荧光原位杂交(Fluorescence in situ hybridization,FISH)是20世纪80年代末在性原位杂交技术基础上发展起来的一种非性分子生物学和细胞遗传学结合的新技术,是以荧光标记取代同位素标记而形成的一种新的原位杂交方法荧光原位杂交技术问世于20世纪70年代后期。1977年,荧光标记的被应用于识别特异性DNA—RNA杂交I I。RNA原位杂交技术经不断改进,其应用的领域已远超出DNA原位杂交技术。1980年,J.G.Baunlan等将应用化学偶联的方法将荧光素结合到RNA探针上用于直接快速的特异性靶序列检测。荧光原位杂交技术技术原理是将荧光素直接或间接标记的核酸探针[或生物素、、dinit rophenyl(I)NP)、aminoacetylAAFfluorine(AAF)等标记的核酸探针与待测样本中的核酸序列按照碱基互补配对的原则进行杂交,经洗涤后直接在荧光显微镜下观察。
荧光原位杂交技术是一种重要的非性原位杂交技术,原理是利用报告分子(如生物素、等)标记核酸探针,然后将探针与染色体或DNA纤维切片上的靶DNA杂交,若两者同源互补,即可形成靶DNA与核酸探针的杂交体。荧光原位杂交技术是一种重要的非性原位杂交技术,原理是利用报告分子(如生物素、等)标记核酸探针,然后将探针与染色体或DNA纤维切片上的靶DNA杂交,若两者同源互补,即可形成靶DNA与核酸探针的杂交体。此时可利用该报告分子与荧光素标记的特异亲和素之间的化学反应,经荧光检测体系在镜下对待DNA进行定性、定量或相对***分析。 [1]
武汉思特进科技发展有限公司成立于2007年,是一家以实验技术研发、实验产品研发、日化产品研发、实验项目承接为一体的高新技术公司;公司实验中心有分子生物学平台、细胞平台、光镜平台、植物组培平台、原核蛋白表达平台、日化产品生产平台;可以开展各类动、植物、***、细胞等生物实验。通过阳性对照可证明杂交过程中各个步骤以及所使用的***都合乎标准,实验方法可靠。
结果 86例患者中有68例FISH检测结果为阳性,剩余18例FISH检测为阴性的患者中有10例为小于5mm的Ta期浅表。与病理学检查结果比较,FISH检测的特异性为100%,敏***为87%。杂交与显色杂交将已标记的探针加入预杂交液即成为杂交液(探针浓度为1μg/m1),切片经2×***短暂浸洗后,滴加杂交液,于湿盒内置37℃或42℃孵育过夜。FISH检测结果发现T1及T2期细胞染色体异常数目明显高于Ta期膀胱(Plt;0.05),但在T1及T2期膀胱间差异无统计学意义(Pgt;0.05)。结论 FISH检测具有敏***高、特异性强、无创伤等优点,在初步诊断及监测方面具有较好的临床应用前景,有可能成为简便、有效的初筛指标之一。
武汉思特进科技发展有限公司成立于2007年,是一家以实验技术研发、实验产品研发、日化产品研发、实验项目承接为一体的高新技术公司;公司实验中心有分子生物学平台、细胞平台、光镜平台、植物组培平台、原核蛋白表达平台、日化产品生产平台;可以开展各类动、植物、***、细胞等生物实验。通过荧光显微镜观察荧光信号可在不改变被分析对象(即维持其原位)的前提下对靶核酸进行分析。***切片与预处理
冰冻切片:新鲜***也可在取材后,直接置入液氮中迅速骤冷,冷冻切片后,4%多聚甲醛固定5~10min,也可保存在-70℃中待用。杂交前切片迅速***至室温并干燥,0.1mol PBS洗三次,2×***洗10min,滴加预杂交液室温孵育1h。
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