武汉思特进科技发展有限公司成立于2007年,是一家以实验技术研发、实验产品研发、日化产品研发、实验项目承接为一体的高新技术公司;公司实验中心有分子生物学平台、细胞平台、光镜平台、植物组培平台、原核蛋白表达平台、日化产品生产平台;可以开展各类动、植物、***、细胞等生物实验。根据异源单链核酸分子间因结构互***生共价键结合,能形成互补杂合双链,而进行分子遗传学研究的一种技术。
原位杂交第二天1.1)将探针回收,放于-20C保存(通常探针可重复使用十次左右)。预杂交1)每个管中置换成大约300ulHYB-溶液,60℃水浴5分钟,避免振荡。2)加入50%甲酰胺/2X***T溶液1毫升,60℃,放置30分钟,重复一次。3)置换2X***T1ml,60℃,放置15分钟。4)置换0.2X***T1ml,60℃,放置30分钟,重复一次。
武汉思特进科技发展有限公司成立于2007年,是一家以实验技术研发、实验产品研发、日化产品研发、实验项目承接为一体的高新技术公司;公司实验中心有分子生物学平台、细胞平台、光镜平台、植物组培平台、原核蛋白表达平台、日化产品生产平台;可以开展各类动、植物、***、细胞等生物实验。此外,原位杂交还是显示细胞亚群分布和动向及病原微生物存在方式和部位的一种重要技术。
原位杂交技术的基本原理是利用核酸分子单链之间有互补的碱基序列,将有性或非性的外源核酸(即探针)与***、细胞或染色体上待测DNA或RNA互补配对,结合成专一的核酸杂交分子,经一定的检测手段将待测核酸在***、细胞或染色体上的位置显示出来。
武汉思特进科技发展有限公司成立于2007年,是一家以实验技术研发、实验产品研发、日化产品研发、实验项目承接为一体的高新技术公司;公司实验中心有分子生物学平台、细胞平台、光镜平台、植物组培平台、原核蛋白表达平台、日化产品生产平台;可以开展各类动、植物、***、细胞等生物实验。目前原位杂交技术在植物中的应用比较广泛,例如在棉花、麦类和树木等的遗传育种方面取得了显著的成就,在畜牧上原位杂交技术主要用于******和***图谱的构建以及转***的检测和等方面。荧光原位杂交(Fluorescence In Situ Hybridization, FISH)技术问世于20世纪70年代后期,其基本原理是利用标记了荧光素的核酸作为探针,按照碱基互补原则,与待检样本中与之互补的核酸经过变性-退火而形成杂交双链核酸,通过荧光显微镜进行检测和分析。
显色以下各步均在室温下进行。
(1)缓冲液I洗1min。
(2)用含2%正常羊和0.3%TritonX-100的缓冲液I孵育切片30min。
(3)用含1%正常羊和0.3%TronX-100的缓冲液I稀释羊抗Dig。
(4)将稀释液滴加在切片上,封口膜覆盖,湿盒内4℃孵育过夜。
(5)缓冲液I洗10min。
(6)缓冲液Ⅱ洗10min。
(7)加显色液,封口膜覆盖,避光室温孵育2~20h,随时镜检,当显色满意时入缓冲液Ⅲ终止显色。
显色液临用前配,其配方为:①NBT 45μl;②X-Phospllate液 35μl;③左旋咪唑 2.4mg;④缓冲液Ⅱ 加至10ml。
(8)常规脱水、透明、封固。
结果:杂交阳性信号为紫蓝色颗粒。
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