武汉思特进科技发展有限公司成立于2007年,是一家以实验技术研发、实验产品研发、日化产品研发、实验项目承接为一体的高新技术公司;公司实验中心有分子生物学平台、细胞平台、光镜平台、植物组培平台、原核蛋白表达平台、日化产品生产平台;可以开展各类动、植物、***、细胞等生物实验。
用泡过预洗液的吸水棉纸轻轻地从膜表面拭去***碎片,以降低杂交背景而不影响阳性杂交信号的强度和清晰度。 将滤膜转到盛有150ml预杂交液的玻璃中,在适宜温度(即在水溶液中杂交时用68℃,而在50%甲酰胺中杂交时用42℃)下,预杂交1-2小时。
原位杂交技术的基本原理是利用核酸分子单链之间有互补的碱基序列,将有性或非性的外源核酸(即探针)与***、细胞或染色体上待测DNA或RNA互补配对,结合成专一的核酸杂交分子,经一定的检测手段将待测核酸在***、细胞或染色体上的位置显示出来。
用于原位杂交的探针可以是单链或双链DNA,也可以是RNA探针。通常探针操作的长度以100-400nt为宜,过长则杂交率减低。近研究结果表明,寡核苷酸探针(16-30 nt)能自由出入***和***细胞壁,杂交效率明显高于长探针,因此,寡核苷酸探针和不对称PCR标记的小DNA探针或体外转录标记的RNA探针是***原位杂交优选探针。
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