武汉思特进科技发展有限公司成立于2007年，是一家以实验技术研发、实验产品研发、日化产品研发、实验项目承接为一体的高新技术公司；公司实验中心有分子生物学平台、细胞平台、光镜平台、植物组培平台、原核蛋白表达平台、日化产品生产平台；可以开展各类动、植物、***、细胞等生物实验。

原位杂交第二天1.1）将探针回收，放于－20C保存（通常探针可重复使用十次左右）。2）加入50%甲酰胺/2X***T溶液1毫升，60℃，放置30分钟，重复一次。3）置换2X***T1ml，60℃，放置15分钟。4）置换0.2X***T1ml，60℃，放置30分钟，重复一次。

武汉思特进科技发展有限公司成立于2007年，是一家以实验技术研发、实验产品研发、日化产品研发、实验项目承接为一体的高新技术公司；公司实验中心有分子生物学平台、细胞平台、光镜平台、植物组培平台、原核蛋白表达平台、日化产品生产平台；可以开展各类动、植物、***、细胞等生物实验。

取材与标本固定

1． 取材　对于原位杂交所用的材料要尽可能新鲜，为了防止RNA的降解，取材要迅速，取材后要尽快固定或冷冻保存。

2．固定　进行原位杂交的***或细胞必须经过固定处理，固定的目的是为了①保持细胞形态原有结构；②保存细胞内的DNA或RNA的水平；③使探针易于进入细胞或***内。

3．固定液　常用固定液有10％甲醛、4％多聚甲醛、冰醋酸-酒精混合液、Bouin氏固定液等。这些固定液都有不同的优缺点因此要根据具体的实验对象，选择的固定液。

4．固定方法　***标本取材后，迅速放入固定液中2～4h，取材***大小为1cm×1cm×0.5cm，不宜太大。必要时，动物***可进行灌流固定，然后将***按要求取材放入20%蔗糖中，4℃过夜，次日可行冰冻切片。

武汉思特进科技发展有限公司成立于2007年，是一家以实验技术研发、实验产品研发、日化产品研发、实验项目承接为一体的高新技术公司；公司实验中心有分子生物学平台、细胞平台、光镜平台、植物组培平台、原核蛋白表达平台、日化产品生产平台；可以开展各类动、植物、***、细胞等生物实验。

显色以下各步均在室温下进行。

（1）缓冲液I洗1min。

（2）用含2%正常羊和0.3％TritonX-100的缓冲液I孵育切片30min。

（3）用含1％正常羊和0.3％TronX-100的缓冲液I稀释羊抗Dig。

（4）将稀释液滴加在切片上，封口膜覆盖，湿盒内4℃孵育过夜。

（5）缓冲液I洗10min。

（6）缓冲液Ⅱ洗10min。

（7）加显色液，封口膜覆盖，避光室温孵育2～20h，随时镜检，当显色满意时入缓冲液Ⅲ终止显色。

显色液临用前配，其配方为：①NBT 45μl；②X-Phospllate液 35μl；③左旋咪唑 2.4mg；④缓冲液Ⅱ 加至10ml。

（8）常规脱水、透明、封固。

结果：杂交阳性信号为紫蓝色颗粒。