杂交与显色
杂交将已标记的探针加入预杂交液即成为杂交液(探针浓度为1μg/m1),切片经2×***短暂浸洗后,滴加杂交液,于湿盒内置37℃或42℃孵育过夜。然后依次经2×***室温浸洗1h,l×***室温浸洗lh,南通原位杂交,0.5×*** 37℃浸洗30min,原位杂交检测,0.5×***室温浸洗30min。注意滴加杂交液时切片勿干燥。
阴性对照用已知不存在相应靶序列的***标本杂交,结果应为阴性。阴性对照可排除在杂交过程中由于非特异性杂交反应等因素造成的假阳性结果。
阳性对照用已知含靶序列的***切片与待检标本同样处理,结果应为阳性,称阳性对照。通过阳性对照可证明杂交过程中各个步骤以及所使用的***都合乎标准,实验方法可靠。尤其当待检标本为阴性时,阳性对照片呈阳性反应可排除待检标本假阴性的可能。故若预期杂交结果为阴性时,就必须设阳性对照,当阳性对照亦不显色,就证明杂交过程的某一步骤或所用***问题。
武汉思特进科技发展有限公司成立于2007年,是一家以实验技术研发、实验产品研发、日化产品研发、实验项目承接为一体的高新技术公司;公司实验中心有分子生物学平台、细胞平台、光镜平台、植物组培平台、原核蛋白表达平台、日化产品生产平台;可以开展各类动、植物、***、细胞等生物实验。
原位杂交第二天1.1)将探针回收,放于-20C保存(通常探针可重复使用十次左右)。2)加入50%甲酰胺/2X***T溶液1毫升,60℃,放置30分钟,重复一次。3)置换2X***T1ml,60℃,原位杂交技术,放置15分钟。4)置换0.2X***T1ml,60℃,放置30分钟,重复一次。
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