武汉思特进科技发展有限公司成立于2007年,是一家以实验技术研发、实验产品研发、日化产品研发、实验项目承接为一体的高新技术公司;公司实验中心有分子生物学平台、细胞平台、光镜平台、植物组培平台、原核蛋白表达平台、日化产品生产平台;可以开展各类动、植物、细菌、细胞等生物实验。
构建了植物表达载体pBRSAg,该载体具有完整的植物表达元件,CaMV35S启动子、农T-DNA左右边界、植物报告基因gus和植物选择标记基因hpt,适用于农的转化;通过冻融法将重组质粒pBRSAg转入根癌农LBA4404中,利用农介导法转化叶盘,经筛选培养获得植株。抗性植株经GUS染色和PCR检测为阳性,初步表明表面抗原基因在中得到表达。
大豆[Glycine max(L.)Merrill]是我国主要的粮食作物和油料作物,但土壤盐渍化成为影响大豆生长和产量的主要限制因素之一。近年来,基因工程技术被广泛应用于提高植物的耐盐性,将抗逆基因导入优良大豆品种,培育抗逆高产新品系,为解决这一问题提供了新途径。目前已有多个耐盐相关基因应用于植物抗逆研究,其中Na /H 逆向转运蛋白基因家族研究较为深入,其主要作用是通过将细胞质内的Na 外排到胞外或者将Na 区隔化到液泡中,来维持细胞内的Na 稳态和Na /K 比相对稳定,从而减少盐胁迫对植株造成的伤害。但有关大豆Na /H 逆向转运蛋白基因的生物学功能分析以及应用的研究还很少。本研究以超表达Gm NHX1基因的拟南芥及酵母nhx1缺失突变体为材料,通过非损伤微测技术、real-time PCR以及酵母互补试验,验证Gm NHX1基因的耐盐功能;借助基因枪法转化洋葱,观察Gm NHX1蛋白的亚细胞定位。在此基础上,利用根癌农介导的大豆子叶节转化法进行Gm NHX1基因的遗传转化。
综述了根癌农介导的遗传转化近几年获得的新进展在转化机理方面,对农自身转录与调控的研究已相当深入,而对有关的植物编码因子的研究也已取得了实质性进展;在转化范围上,对真菌与裸子植物的转化取得了不少进展,单子叶植物尤其是一些有重要经济价值的禾谷类作物应用农介导相继获得了转化植株;在转化方法方面,发展了新的简单有效的整体植株法,并将T-DNA转移和整合原理结合到基因枪等DNA直接转移方法上;细菌人工染色体与农的联合应用赋予了其大片段DNA转化的功能.针对上述领域,指出了其中仍然存在的一些问题并提出了一些构想.
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