武汉思特进科技发展有限公司成立于2007年,是一家以实验技术研发、实验产品研发、日化产品研发、实验项目承接为一体的高新技术公司;公司实验中心有分子生物学平台、细胞平台、光镜平台、植物组培平台、原核蛋白表达平台、日化产品生产平台;可以开展各类动、植物、细菌、细胞等生物实验。
原位杂交技术的基本原理是利用核酸分子单链之间有互补的碱基序列,将有性或非性的外源核酸(即探针)与组织、细胞或染色体上待测DNA或RNA互补配对,结合成专一的核酸杂交分子,经一定的检测手段将待测核酸在组织、细胞或染色体上的位置显示出来。
显色以下各步均在室温下进行。
(1)缓冲液I洗1min。
(2)用含2%正常羊和0.3%TritonX-100的缓冲液I孵育切片30min。
(3)用含1%正常羊和0.3%TronX-100的缓冲液I稀释羊抗Dig。
(4)将稀释液滴加在切片上,封口膜覆盖,湿盒内4℃孵育过夜。
(5)缓冲液I洗10min。
(6)缓冲液Ⅱ洗10min。
(7)加显色液,封口膜覆盖,避光室温孵育2~20h,植物组织原位杂交,随时镜检,当显色满意时入缓冲液Ⅲ终止显色。
显色液临用前配,其配方为:①NBT 45μl;②X-Phospllate液 35μl;③左旋咪唑 2.4mg;④缓冲液Ⅱ 加至10ml。
(8)常规脱水、透明、封固。
结果:杂交阳性信号为紫蓝色颗粒。
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