微生物限度检查

4.供试品中微生物的回收

微生物的回收可采用平皿法、薄膜过滤法或MPN法。

（1）平皿法 平皿法包括倾注法和涂布法。表1中每株试验菌每种培养基至少制备2个平皿，以算术均值作为计数结果。

倾注法 取照上述“供试液的制备” “接种和稀释”和“抗jun活性的去除或灭活” 制备的供试液1ml，置直径90mm的无菌平皿中，注入15～20ml温度不超过45℃熔化的胰酪大豆胨琼脂或沙氏葡萄糖琼脂培养基，混匀，凝固，倒置培养。若使用直径较大的平皿，培养基的用量应相应增加。按表1规定条件培养、计数。同法测定供试品对照组及菌液对照组菌数。计算各试验组的平均菌落数。

涂布法 取15～20ml温度不超过45℃的胰酪大豆胨琼脂或沙氏葡萄糖琼脂培养基，注入直径90mm的无菌平皿，凝固，制成平板，采用适宜的方法使培养基表面干燥。若使用直径较大的平皿，培养基用量也应相应增加。每一平板表面接种上述照“供试液的制备” “接种和稀释” 和“抗jun活性的去除或灭活”制备的供试液不少于0.1ml。按表1规定条件培养、计数。同法测定供试品对照组及菌液对照组菌数。计算各试验组的平均菌落数。

抑菌效力-菌液制备

抑菌效力-菌液制备

取大肠埃希菌、金***putao球菌、铜绿假单胞菌的新鲜培养物用 pH7.0 无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或 0.9%无菌氯化钠溶液制成 适宜浓度的菌悬液。取表 2 黑曲霉的新鲜培养物加入 3～5ml 含 0.05％（ml/ml）聚山梨酯80 的 pH7.0 无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或 0.9%无菌氯化钠溶液，食品微生物检测，将孢子洗脱。然后，采用适宜方法吸出孢子悬液至无菌试管内，用含 0.05％（ml/ml）聚山梨酯80 的 0.9%无菌氯化钠溶液制成适宜浓度的孢子悬液。

菌液制备后若在室温下放置，应在 2 小时内使用；若保存在 2～8℃，可在24 小时内使用。黑曲霉孢子悬液可保存在 2～8℃，在验证过的贮存期内使用。

培养基的制备

1.胰酪大豆胨液体培养基

胰酪胨17.0克

氯化钠5.0克

大豆木瓜蛋白酶消化物3.0克

磷酸氢二钾2.5克

葡萄糖（一水合）2.5克

水1000mL

除葡萄糖外，取上述成分，微生物检测中心，混合，微温溶解，滤过，调节 pH 值使灭菌后在 25℃的 pH 值为 7.3±0.2，天门微生物检测，加入葡萄糖，分装，灭菌。

胰酪大豆胨液体培养基置 20～25℃培养。

2. 胰酪大豆胨琼脂培养基

胰酪胨15.0克

氯化钠5.0克

大豆木瓜蛋白酶水解物5.0克

琼脂15.0克

水1000ml

除琼脂外，取上述成分，混合。微温溶解，调节 pH 值使灭菌后在 25℃的 pH 值为 7.3±0.2，加入琼脂，加热溶化后，摇匀，分装，灭菌。

3.沙氏葡萄糖液体培养基

沙氏葡萄糖琼脂培养基照微生物限度检查法（附录ⅩⅢ C）制备。

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