——大肠gan菌简介——
大肠埃希氏菌(Escherichia coli)通常被称为大肠gan菌,是Escherich在1885年发现的,在相当长的一段时间内,一直被当作正常肠道菌群的组成部分,认为是非致病菌。直到20世纪中叶,才认识到一些特殊血型的大肠gan菌对人和动物有病原性,尤其对***和幼畜(禽),抑菌效力检测,常引起严重腹泻和坏血症,它是一种普通的原核生物,根据不同的生物学特性将致病性大肠gan菌分为6类:肠致病性大肠gan菌(EPEC)、肠产毒性大肠gan菌(ETEC)、肠侵袭性大肠gan菌(EIEC)、肠血性大肠gan菌(EHEC)、肠黏附性大肠gan菌(EAEC)和弥散粘附性大肠gan菌(DAEC).。大肠gan菌属于革兰氏阴性***(G-)。
培养基的制备
1.胰酪大豆胨液体培养基
胰酪胨17.0克
氯化钠5.0克
大豆木瓜蛋白酶消化物3.0克
磷酸氢二钾2.5克
葡萄糖(一水合)2.5克
水1000mL
除葡萄糖外,取上述成分,混合,微温溶解,滤过,调节 pH 值使灭菌后在 25℃的 pH 值为 7.3±0.2,加入葡萄糖,分装,灭菌。
胰酪大豆胨液体培养基置 20~25℃培养。
2. 胰酪大豆胨琼脂培养基
胰酪胨15.0克
氯化钠5.0克
大豆木瓜蛋白酶水解物5.0克
琼脂15.0克
水1000ml
除琼脂外,取上述成分,混合。微温溶解,调节 pH 值使灭菌后在 25℃的 pH 值为 7.3±0.2,加入琼脂,加热溶化后,摇匀,分装,灭菌。
3.沙氏葡萄糖液体培养基
沙氏葡萄糖琼脂培养基照微生物限度检查法(附录ⅩⅢ C)制备。
计数方法适用性试验中,采用平皿法或薄膜过滤法时,试验组菌落数减去供试品对照组菌落数的值与菌液对照组菌落数的比值应在0.5~2范围内;采用MPN法时,试验组菌数应在菌液对照组菌数的95%置信限内。若各试验菌的回收试验均符合要求,照所用的供试液制备方法及计数方法进行该供试品的需氧菌总数、霉菌和酵母菌总数计数。
方法适用性确认时,抑菌效力测定,若采用上述方法还存在一株或多株试验菌的回收达不到要求,抑菌效力测试,那么选择回收接近要求的方法和试验条件进行供试品的检查。
供试品检查
检验量
检验量即一次试验所用的供试品量(g、ml或c㎡)。
一般应随机抽取不少于2个***小包装的供试品,混合,取规定量供试品进行检验。
除另有规定外,一般供试品的检验量为10g或10ml;膜剂为100c㎡;贵重***、微量包装***的检验量可以酌减。检验时,应从2个以上***小包装单位中抽取供试品,大蜜丸还不得少于4丸,抑菌效力,膜剂还不得少于4片。
供试品的检查
按计数方法适用性试验确认的计数方法进行供试品中需氧菌总数、霉菌和酵母菌总数的测定。
胰酪大豆胨琼脂培养基或胰酪大豆胨液体培养基用于测定需氧菌总数;沙氏葡萄糖琼脂培养基用于测定霉菌和酵母菌总数。
阴性对照试验 以稀释液代替供试液进行阴性对照试验,阴性对照试验应无菌生长,如果阴性对照有菌生长,应进行偏差调査。
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