抑菌剂效力测定用培养基应进行培养基的适用性检查,包括成品培养基、由脱水培养基或按配制的培养基均应检查。
7.2试验所用的菌株传代次数不得超过5代(从保藏中心获得的冷冻干燥为第0代),抑菌效力试验,并采用适宜的保藏技术进行保存,以保证试验菌株的生物学特性。
铜绿假单胞菌 (Pseudomonas aeruginosa)〔CMCC(B)10 104〕
大肠埃希菌 (Escherichia coli) 〔CMCC(B) 44 102〕
金***菌 (Staphylococcus aureus)〔CMCC(B)26 003〕
白色菌 (Candida albicans) 〔CMCC(F) 98 001〕
黑曲霉 (Aspergillus niger) 〔CMCC(F)
98 003〕
黑曲霉菌悬液:操作时关闭空调系统及洁净工作台风机。接种黑曲霉的新鲜培养物至沙氏葡萄糖琼脂培养基中,23~28℃培养5~7天,加入3~5ml含0.05%(ml/ml)聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液,将孢子洗脱,然后,用适宜方法吸出孢子悬液至无菌试管内,用含0.05%(ml/ml)聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液稀释至 ,用比浊法制成每1ml含孢子数108cfu的孢子悬液。
4.供试品中微生物的回收
微生物的回收可采用平皿法、薄膜过滤法或MPN法。
(1)平皿法 平皿法包括倾注法和涂布法。表1中每株试验菌每种培养基至少制备2个平皿,以算术均值作为计数结果。
倾注法 取照上述“供试液的制备” “接种和稀释”和“抗jun活性的去除或灭活” 制备的供试液1ml,抑菌效力检查法,置直径90mm的无菌平皿中,注入15~20ml温度不超过45℃熔化的胰酪大豆胨琼脂或沙氏葡萄糖琼脂培养基,抑菌效力测定,混匀,凝固,倒置培养。若使用直径较大的平皿,培养基的用量应相应增加。按表1规定条件培养、计数。同法测定供试品对照组及菌液对照组菌数。计算各试验组的平均菌落数。
涂布法 取15~20ml温度不超过45℃的胰酪大豆胨琼脂或沙氏葡萄糖琼脂培养基,注入直径90mm的无菌平皿,抑菌效力,凝固,制成平板,采用适宜的方法使培养基表面干燥。若使用直径较大的平皿,培养基用量也应相应增加。每一平板表面接种上述照“供试液的制备” “接种和稀释” 和“抗jun活性的去除或灭活”制备的供试液不少于0.1ml。按表1规定条件培养、计数。同法测定供试品对照组及菌液对照组菌数。计算各试验组的平均菌落数。
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