武汉默沙克生物????科技有限公司是一家专门从事生物制剂研发与生产的企业。目前可提供各种抗1体、***学***盒、生化***、ELISA***盒、分子生物学***等多用途多属种的高品质产品,服务涉及分子生物学、细胞生物学、***学等生命科学领域。
4.细胞上清液样本如何处理?
检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心20分钟左右(1000×g)。仔细收集上清。
5.细胞裂解液样本如何处理?
检测细胞内的成份时,用PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液,细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融或者超声破碎,以使细胞***并放出细胞内成份。离心10分钟左右(5000×g)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
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2) 激1素,包括小分子量的甾体激1素等。
3) 抗生1素和药1物。
4) 病原体抗原,HBsAg、HBeAg等。
5) 另外,也可利用纯化的抗原检测标本中的抗1体,例如抗-HBs等。
5.标记的***测定
如上所述,***测定是一种很敏感的测定方法,抗原抗1体反应后直接测定形成的沉淀或浊度,敏感度可达5~10μg/ml,但在临床检验中,某些待测物在标本中的含量远低于这一水平,因此要寻找增加敏感度的方法。标记的***测定是将检测***中的抗原或抗1体用可微量测定的物质加以标记,通过测定标记物来提高敏感度。在放1射***测定和酶***测定中,elisa***盒,标记物分别为放1射性核素和酶,后用测定放1射性和酶活力来计算待检物的量,敏感度可比直接测定沉淀物提高数百至数千倍。在标记***测定中,一般加入过量的标记***以保证与待测物彻底反应。以标记抗1体(Ab ※)检测抗原(Ag)为例,反应式如下:
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假使在被测分子的不同位点上含有多个相同的决定簇,例如HBsAg的a决定簇,也可用针对此决定的同一单抗分别包被固相和制备酶结合物。但在HBsAg的检测中应注意亚型问题,HBsAg有adr、adw、ayr、ayw4个亚型,虽然每种亚型均有相同的a决定簇的反应性,这也是用单抗作夹心法应注意的问题。
双抗1体夹心法测抗原的另一注意点是类风1湿因子(RF)的干扰。RF是一种自身抗1体,多为IgM型,能和多种动物IgG的Fc段结合。用作双抗1体夹心法检测的血1清标本中如含有RF,它可充当抗原成份,同时与固相抗1体和酶标抗1体结合,表现出假阳性反应。采用F(ab')或Fab片段作酶结合物的***,由于去除了Fc段,从而消除RF的干扰。双抗1体夹心法ELISA***是否受RF的影响,已被列为这类***的一项考核指标(参见6.2)。
双抗1体夹心法适用于测定二价或二价以上的大分子抗原,但不适用于测定半抗原及小分子单价抗原,因其不能形成两位点夹心。
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