武汉默沙克生物????科技有限公司是一家专门从事生物制剂研发与生产的企业。目前可提供各种抗1体、***学***盒、生化***、ELISA***盒、分子生物学***等多用途多属种的高品质产品,服务涉及分子生物学、细胞生物学、***学等生命科学领域。
3、 细胞培养上清
取细胞培养上清到离心管,1000×g离心20min,除去细胞碎片及杂质,取上清,-20℃或-80℃保存,避免反复冻融。
4、 细胞裂解液
1) 吸去培养板内的培养基,用胰酶消化细胞,加适量培养基将细胞从培养板上吹下来。悬浮细胞可省略。
2) 收集细胞悬液,1000×g离心10min,弃去培养基,用预冷的PBS润洗3次。
3) 加入适量的预冷PBS或细胞裂解液(临用前加入蛋白酶抑1制剂)重悬细胞。通常6孔板一个孔的细胞量需要150~250μL PBS重悬。
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IgG可被木瓜蛋白酶分解为三个区段,其中两个相同的区段称抗原结合片段(Fab)。每个Fab都保存结合抗原的能力,但只有一个抗原结合位点,是单价的,与抗原结合后不出现凝集或沉淀。另一区段称Fc段,无抗1体活性,但具有IgG特有的抗原性。
IgG可被胃蛋白酶分解为两个片段,一个Fab双体,称F(ab')2,能和两个相同的抗原结合;另一片段类似Fc,随后被分解成小分子多肽,无生物活性。
IgM是由五个单体组成的五聚体,含 10个重链和10个轻链,具有10个抗原结合价,由于空间位置的影响,只表现为五个抗原结合价。IgM分子量约为900000,IgG分子量约为150000。
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17.脱水Ⅱ
将切片放入95%乙醇中洗去多余的红色,然后放入无水乙醇中3-5min。***后用吸水纸吸干多余的乙醇。
18.透明
切片放入二甲本Ⅰ、Ⅱ中各5min。
二甲本应尽量保持无水,应经常更换,elisa***盒,或用纱布包无水硫1酸铜放入染色缸内吸收水分。切片如在二甲本中出现白雾现象,说明脱水未尽,应退回乙醇中重新脱水,否则切片难以镜检。
19.封藏:中性树胶封存
因切片经二甲本透明,使用中性树胶作为封藏剂,树胶可用二甲本稀释至合适的稠度。
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