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6．酶***测定

酶***测定（enzymeimmunoassay）可分为均相（homogenous）和非均相（heterogenous）两种类型。在均相E0IA中可不需进行游离的和结合的标记物的分离而直接测定标记物。例如在某种条件下，抗原抗1体反应后形成的酶标记抗原抗1体复合物中的酶失去其对底物作用的活力，因而测出的酶活力直接反映游离的酶标记物。均相E0IA在临床检验中较少应用。非均相E0IA需***行游离的和结合的标记物的分离。如前所述，固相载体可用作一种分离手段。这种固相酶***测定方法在1971年***1初建立时称为酶联***吸附剂测定（enzymelinked immunosorbent assay），简称ELISA，在国内有译作酶联***吸附试验的，虽然含义不完全确切，但已习用。

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　在一步法测定中，当标本中受检抗原的含量很高时，过量抗原分别和固相抗1体及酶标抗1体结合，而不再形成'夹心复合物'。类同于沉淀反应中抗原过剩的后带现象，此时反应后显色的吸光值（位于抗原过剩带上）与标准曲线（位于抗1体过剩带上）某一抗原浓度的吸光值相同（参见1.3.2，图1-4），如按常法测读，所得结果将低于实际的含量，这种现象被称为钩状效应（hook effect），因为标准曲线到达高峰后呈钩状弯落。钩状效应严重时，酶联******盒厂家，反应甚至可不显色而出现假阴性结果。因此在使用一步法***测定标本中含量可异常增1高的物质（例如血1清中HBsAg、AFP和尿液hCG等）时，应注意可测范围的***1高值。用高亲和力的单克1隆抗1体制备此类***可削弱钩状效应。

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　双抗1体夹心法是检测抗原***1常用的方法，操作步骤如下：

　　1）将特异性抗1体与固相载体联结，形成固相抗1体。洗涤除去未结合的抗1体及杂质。

　　2）加受检标本，保温反应。标本中的抗原与固相抗1体结合，形成固相抗原抗1体复合物。洗涤除去其他未结合物质。

　　3）加酶标抗1体，保温反应。固相***复合物上的抗原与酶标抗1体结合。彻底洗涤未结合的酶标抗1体。此时固相载体上带有的酶量与标本中受检抗原的量相关。

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