细胞老化的表现:细胞折光性变差,镜下可见细胞“变薄”,做转染实验时,细胞死率会较高。但培养液不会发生迅速变黄的现象,仍清亮。(但如果是***污染的话,一般会出现培养液的迅速变黄,混浊,镜下可见大量繁殖的***;若是支原体污染的话,细胞也会失去正常形态,会有细胞的死)。细胞的贴壁性减弱,开始有细胞漂浮于培养液中。
将细胞冻存管由液态氮中取出,置于室温回温,不用水浴溶解。此时可准备新鲜培养 基、无菌15ml离心管、培养瓶。在生物安全柜内,直接以少量培养基反复冲融,使细胞团块化冻。 先在无菌15ml离心管中加入5ml培养基,再将化冻的细胞悬液加入离心管中。以200~300g,3分钟离心收集细胞。 倒去上清液,重悬细胞,移到培养瓶中培养。
在生物反应器中生产需要对悬浮的生产细胞扩大培养。多个用于生产慢病毒的细胞系(293T、293FT、293SF-3F6)被报道易于在化学成分限定的培养基(Freestyle 293 and F17, Invitrogen, Carlsbad, CA; HyQSFM4TransFx293, Hyclone, Logan, UT)中适应悬浮培养。这些细胞可以在没有为载体的情况下迅速悬浮生长,这使得它们的培养和扩大比贴壁培养的细胞容易很多。此外,培养基中没有其他动物来源的组分是临床生产合适的情况,它可以降低被外源物质污染的风险。
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