单纯***Ⅱ型***IgG(HSVⅡAb-IgG)检测
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[测定方法] ELISA法
[方法学原理] 在微孔表面包被纯化的HSV抗原。被稀释过的患者***加入微孔中。如存在HSV-ⅡAb—IgG可与微孔上抗原相结合。然后洗去未结合物质,再加入酶联液,与抗原***复合物结合。洗去过量的酶联液。***后加入底物和色原(显色液)。在特定时间终止酶联液的催化反应。所产生的颜色强度与标本中HSV—ⅡAb-IgG含量呈正相关。通过***与校正和对照相比,读出结果。
[标本准备] 静脉抽血2ml,不抗凝。
[***]
1.微孔板
2.样品稀释液
3.HRP-抗人IgG酶结合物
4.阴性对照
5.阳性对照
6.洗涤剂
7.TMB显色液
8.终止液
[仪器设备] ***或全自动酶联***检测仪。
[测定步骤]
1.吸取5ul***标本加入250ul标本稀释液中,做1:51稀释。
2.吸取100ul稀释过的***、阳性对照、阴性对照和校正液(不稀释),加入微孔板内,设空白对照1孔。振荡混匀,去除孔内液体中气泡,室温环境中孵育20min。
3.弃去孔内液体,用洗涤液洗5次。
4.每孔再加入100ul酶联结合物,室温环境中孵育20rain。
5.弃去孔中酶联液,用洗涤液洗5次。
6.每孔加入100ul TMB显色液,室温环境中孵育10min。
7.每孔加人100rd终止液,终止反应,充分混匀。
8.用***(波长为450nm)读取吸光度。以待测样本吸光度大于校正液孔吸光度为阳性。
[注意事项]
1.整个检测过程应符合实验室质量手册和生物安全守则规定,严防交叉污染。
2.所有样品、洗弃液和各种废弃物都应按***物处理。
3.***应保存于2~
4.洗涤时各孔均应加满洗涤液,防止孔内有游离酶未洗净,每次洗板后均应在吸水纸上拍干。
5.血标本应分离出***保存,2~
6.***在储存或使用过程中,禁止过热、曝晒或强光。
[正常参考值] HSV—ⅡAb-IgG阴性
[临床意义] HSV******主要是通过***引起宫内***,诱发早产、死胎、胎儿畸形及脑、眼等多***损害。HSV也可通过呼吸道或产道造成新生儿***,可呈无症状隐性***,也可引起不同形式或不同程度的临床表现,轻者仅为口腔、皮肤、眼部***,重者则呈******系统***甚至全身性播散性***。
HSVAb-IgM阳性提示为患者***早期或原发性***。但IgM***因在检测过程中易受各种因素的影响,出现假阴性结果,因此HSVAb—IgM阴性结果不能完全排除HSV***。HSVAb—IgG阳性,说明曾经***这种病原体,具有一定***力。连续监测IgG***水平,若IgG迅速升高到4倍以上的较高水平时,患者可能为HSV再次***。
在HSV的两个亚型中,HSV-I型主要通过呼吸道或与患者病损部位直接接触而传播,引起呼吸系统、皮肤黏膜病变,***妇女***该病毒可引起宫内***;HSV-Ⅱ型主要通过接吻和***传播,引起性***病变和新生儿***。
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