降低水力停留时间至20h，待其稳定运行，出水COD的去除率稳定在80%时，观察厌氧反应器内厌氧颗粒污泥情况。经过分析，制备的厌氧颗粒污泥要以甲1烷八叠球菌类型为主，同时存在少量丝状菌与杆1菌，外观直径以2-3mm为主。通过判断，厌氧反应器内厌氧颗粒污泥的二次培养成功。继续运行3个月，厌氧反应器COD去除率稳定(达90%以上)，无任何酸化等现象， 产气量及组分均很稳定，运行正常。

主要研究结果如下： (1)通过控制有机负荷(organic loading rate, OLR)为8.8kg化学需氧量(chemicaloxygen demand, COD)·m~(-3)·d~(-1)、液体上升流速为5.4m·h~(-1)和水力停留时间(hydraulicretention time, HRT)为5.9h处理啤酒废水，好氧剩余活性污泥实现厌氧颗粒污泥规模化培养，颗粒污泥粒径达到2.5mm，粒径大于0.5mm的颗粒污泥占反应器生物总量的比率为57%。

粒径2.5mm左右成熟的厌氧颗粒污泥中紧密粘附的胞外聚合物(tightlybound-extracellular polymeric substances, TB-EPS)和松散附着的EPS(loosely bound-EPS,LB-EPS)分别是30.2mg total organic carbon(TOC)·g suspended solids (SS)~(-1)和15.2mgTOC·g SS~(-1)，是接种污泥的1.9倍和2.6倍。研究结果表明厌氧颗粒污泥规模化培养机理是微生物代谢产物EPS的内因和选择压的外因共同作用，EPS中的TB-EPS影响颗粒的大小，LB-EPS影响颗粒的粘结能力和结构强度。