3.扩增反应混合物配制和扩增区该区域主要进行的操作为DNA或cDNA扩增。此外,已制备的DNA模板和合成的cDNA(来自样本制备区)的加入和主反应混合液(来自***贮存和制备区)制备成反应混合液等也可在本区内进行。在巢式PCR测定中,通常在轮扩增后必须打开反应管,因此巢式扩增有较高的污染***性,第二次加样必须在本区内进行。
本区的压力梯度要求为:相对于邻近区域为负压,以避免气溶胶在本区漏出,昌都地区PCR核酸检测实验室净化,为避免气溶胶所致的污染,PCR核酸检测实验室净化方案,应尽量减少在本区内的不必要走动。个别操作如加样等应在超净工作台内进行。4.扩增产物分析区该区域主要进行的操作为扩增片段的测定。如使用全自动封闭分析仪器检测,此区域可不设。
本区是的扩增产物污染来源,因此对本区的压力梯度的要求为:相对于邻近区域为负压,PCR核酸检测实验室净化设计,以避免扩增产物从本区扩散至其它区域。
PCR实验室的相关设置
要完成一组PCR实验,通常需要经过***配制、样品处理、核酸扩增和产物分析4个实验过程。
这4个实验过程的实验用房应相邻布置,组成一个***的PCR实验区。标准的PCR实验区包括:***准备区、标本制备区、扩增区、产物分析区、各区配套的缓冲区及公共走廊。
PCR实验室整体平面布局某***PCR实验室平面布局如图1所示,整个区域有一个公用走廊,每个***实验区设有专门的缓冲区。通过压差控制,使整个PCR实验过程中***和标本免受气溶胶的污染,并且降低扩增产物对人员和环境的污染。
***准备区该实验区主要进行的操作为贮存***的制备、***的分装和主反应混合液的制备。
***和用于标本制作的材料应直接运送至该区,不得经过其他区域。***原材料必须贮存在本区内,PCR核酸检测实验室净化公司,并在本区内制备成所需的贮存***。
***准备区配备有2~8°C冰箱和-80°C冰箱,计算冷负荷时,需要将它们计算在内。
房间的面积宜控制在15m2~20m2。本区的压力梯度要求为:相对正压状态,以防止外界含核酸气溶胶的空气进入,造成污染。
标本制备区该区域主要进行的操作为临床标本的保存、核酸(RNA、DNA)提取、贮存及其加入至扩增反应管和测定RNA时cDNA的合成。
标本制备区配备有2~8°C冰箱和-20°C冰箱,计算冷负荷时,需要将它们计算在内。在标本制备区,还需要配备生物安全柜,用于进行提取核酸的操作。
版权所有©2024 产品网