04污染的预防与控制

PCR实验室设计的核心问题是如何避免污染。在实际工作中，常见的有以下几种污染类型:扩增产物的污染;天然***组DNA的污染;***的污染以及标本间的污染。因此要避免污染，首先应是预防，而不是排除。

工作区域的严格划分，各个实验区域要有明显的标记(如醒目的门牌或不同的地面颜色等)，以避免各个不同实验区域设备物品、***等发生混淆。

合理的系统设置，合理的空调通风系统设置，尽量采用全送全排的空调系统;严格的气流压力控制，保证不同的实验区内不同的压力要求。

规范的操作，临床***扩增检验实验室的技术人员必须进行上岗培训，在实验操作过程中，操作者必须戴手套，并经常更换。清洁工作及时、正确。实验工作结束后，必须立即对本区进行清洁。

严格的管理:严格控制进出实验室的人员。在各个实验区域使用带有明显区别标志的工作服(如不同颜色)，当工作人员离开时不得将本区的工作服带至其它区域;尽量减少在实验区内不必要的走动以减少交叉污染的可能性。扩增产物分析区是的扩增产物污染来源，废液不能在实验室中倾倒，必须经消毒液浸泡消毒后在远离实验室的地方弃掉，用过的吸头等一次性材料也应经消毒液浸泡消毒后统一处理，如焚烧等;

总之，实验室建设是一个复杂的问题，这里不讨论人员的问题，实验室人员的培养与沉淀，也需要一个过程，在建设的过程中要因地制宜，不要生搬硬套，结合自己的实际慢慢摸索出适合自己发展的建设思路。科学合理建设实验室，pcr实验室污染，更好的发挥实验室的作用。

PCR实验室平面布局

临床***扩增检测实验室原则上分为四个单独的工作区域：***贮存和准备区、标本制备区、扩增反应混合物配置和扩增区、扩增产物分析区。为避免交叉污染，进入各个工作区域必须严格遵循单一方向进行，即只能从***贮存和准备区—标本制备区—扩增反应混合物配置和扩增区—扩增产物分析区。

三实验室空调通风系统设计及压力控制

PCR实验室并没有严格的净化要求，但是为了避免各个实验区域间交叉污染的可能性，宜采用全送全排的气流***形式。同时，要严格控制送、排风的比例以保证各实验区的压力要求。1.***贮存和准备区该实验区主要进行的操作为贮存***的制备、***的分装和主反应混合液的制备。***和用于标本制作的材料应直接运送至该区，不得经过其他区域。***原材料必须贮存在本区内，并在本区内制备成所需的贮存***。对与气流压力的控制，本区并没有严格的要求。2.标本制备区该区域主要进行的操作为临床标本的保存、核酸（RNA、DNA）提取、储存及其加入至扩增反应管和测定RNA时cDNA的合成。

本区的压力梯度要求为：相对于邻近区域为正压，pcr实验室建设，以避免从邻近区进入本区的气溶胶污染。另外，由于在加样操作中可能会发生气溶胶所致的污染，所以应避免在本区内不必要的走动。

为避免提取的核酸在柜内反复循环，造成标本之间的交叉污染，出现假阳性结果，该区域配备的生物安全柜必须是B2型的。生物安全柜工作区垂直气流全部来自实验室，排风经过过滤器(www.rfilter.com)过滤后直接排至室外，不允许回到安全柜和实验室中。

根据经验，如果实验室内配备生物安全柜，每配备一台，实验室的面积增加10m2;标本制备区的面积宜在25m2~30m2之间。本区的压力梯度要求为:相对于邻近区域为正压，以避免从邻近区进入本区的气溶胶污染。

扩增室该区域主要进行的操作为DNA或cDNA扩增。此外，已制备的DNA模板和合成的cDNA(来自样本制备区)的加入和主反应混合液(来自***贮存和制备区)制备成反应混合液等也可在本区内进行。

在巢式PCR测定中，通常在轮扩增后必须打开反应管，因此巢式扩增有较高的污染***性，第二次加样必须在本区内进行。

扩增室主要配备PCR实验室的核心仪器PCR仪，本文实例中使用了ABI7500和ABI9700两种PCR仪。

在实验室建造过程中，pcr实验室装修，需要给PCR仪配备专门的UPS电源，奉贤区pcr实验室，以保证其正常工作。该区面积控制在15m2~20m2。

本区的压力梯度要求为:相对于邻近区域为负压，以避免气溶胶从本区漏出。为避免气溶胶所致的污染，应尽量减少在本区内的不必要的走动。个别操作如加样等应在超净台内进行。建议采用5~10Pa压差，在控制上比较容易实现。

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