济南细胞培养实验室 万级无菌实验室 微生物实验室净化设计安装 欧凯净化***公司

细胞培养是指在体外模拟体内环境（无菌、适宜温度、酸碱度和一定营养条件等），使之生存、生长、繁殖并维持主要结构和功能的一种方法。细胞培养也叫细胞***技术，在生物学中的正规名词为细胞培养技术。不论对于整个生物工程技术，还是其中之一的生物***技术来说，细胞培养都是一个必不可少的过程，细胞培养本身就是细胞的大规模***。细胞培养技术可以由一个细胞经过大量培养成为简单的单细胞或***分化的多细胞，这是***技术必不可少的环节，而且细胞培养本身就是细胞的***。细胞培养技术是细胞生物学研究方法中重要和常用技术，通过细胞培养既可以获得大量细胞，又可以借此研究细胞的信号转导、细胞的合成代谢、细胞的生长增殖等。

 

一、分类：

 

动物细胞培养

 

在所有的细胞离体培养中，***困难的是动物细胞培养。下面是它所需要的特殊条件。

⑴***：动物细胞离体培养常常需要***。***常用的是小牛***。***提供生长必需因子，如***、微量元素、矿物质和脂肪。在这里，***等于是动物细胞离体培养的天然营养液。

⑵支持物：大多数动物细胞有贴壁生长的习惯。离体培养常用玻璃，塑料等作为支持物。

⑶气体交换：二氧化碳和氧气的比例要在细胞培养过程中不断进行调节，不断维持所需要的气体条件。

植物细胞培养

⑴光照：离体培养的植物细胞对光照条件不甚严格，因为细胞生长所需要的物质主要是靠培养基供给的。但光照不但与光合作用有关，而且与细胞分化有关，例如光周期可对性细胞分化和开花调控作用，所以以获得植株为目的的早期植物细胞培养过程中，光照条件特别重要。以植物细胞离体培养方式获得重要物质，如***的过程，植物细胞大多是在反应器中悬浮培养。

⑵***：植物细胞的分裂和生长特别需要植物***的调节，促进生长的生长素和促进细胞分裂的分裂素是***基本的***。植物细胞的分裂，生长，分化和个体生长周期都有相应的***参与调节。和动物细胞相比，植物细胞离体培养对***要求的原理已经了解，其应用技术也已相当成熟，已经有一套能使用的培养液。同时解决了植物细胞对水、营养物、***、渗透压、酸碱度、微量元素等的需求。

 

 

微生物细胞培养

微生物多为单细胞生物，野生生存条件比较简单。所以微生物人工培养的条件比动植物细胞简单得多。其中厌氧微生物培养比好氧微生物复杂，因为严格厌氧需要维持二氧化碳等非氧的惰性气体浓度，而好氧微生物则只需要通过不断搅拌提供无菌氧气。微生物对培养条件要求不如动植物细胞那样苛刻，玉米浆、蛋白胨、麦芽汁、酵母膏等成为良好的微生物天然培养基。对于一些特殊微生物的营养条件要求，可以在这些天然培养基的基础上额外添加。

二、环境因素

1．无菌环境

***和无菌是体外培养细胞的首要条件。细胞在***内，***系统和***系统可抵抗微生物或其他***物质的***，但细胞在体外培养的过程中，缺乏机体***系统的保护而丧失对微生物的防御能力和对***物质的***能力。为保证细胞能在体外环境中生长繁殖，必须要确保无菌工作区域、良好的个人卫生、无菌***和培养基以及无菌操作。

常见的微生物污染有支原体、***、***。支原体无致死毒性，可与细胞长期共存，对细胞有潜在影响，但体积小，不易鉴别，可借助于地衣红或Hoechst33342染色来进行检测。***增殖快，在短时间内即可大量扩增，并产生******细胞。***的种类繁多，肉眼可见，漂浮于培养液面上，可呈丝状、管状或树枝状等。

2.合适的温度

一般哺乳类与禽类细胞在体外培养的适宜温度是37～38℃，不适宜的环境温度会影响细胞的生长。细胞对低温的耐受能力要强于对高温的耐受能力，在低温下，细胞的代谢活力及核分裂能力降低。若温度不低于0℃，虽然细胞代谢受到影响，但无损伤作用；25～35℃时，细胞以缓慢的速度生长；但若被置于40℃数小时，则不仅不利于细胞生存、生长，甚至可导致其***。

3.适宜的渗透压

高渗溶液或低渗溶液会引起细胞发生褶皱、肿胀、***。因此，渗透压是体外培养细胞的重要条件之一。多数体外培养的细胞对渗透压都有一定的耐受能力，实际应用中，260～320mmol/L的渗透压可适用于大多数细胞。

4．气体环境与pH

细胞的体外培养需要理想的气体环境，氧气、二氧化碳是细胞生存的必要条件。氧气参与细胞的三羧酸循环，为细胞生存、代谢与合成提供能量；二氧化碳既是细胞的代谢产物，是细胞生长的必需成分，又与维持培养液的pH有关。大多数细胞适宜的pH范围往往是7.2～7.4。在开放式培养中，以5%的二氧化碳气体比例为宜。

 

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