LncRNA芯片
Long non-coding RNAs(lncRNAs)是一类转录本长度超过200 nt的功能性非编码RNA分子。目前的研究已证实,lncRNA参与X染色体沉默,***组印记以及染色质修饰,转录ji活,南京分子生物检测,转录干扰,核内运输等多种重要调控过程。随着对lncRNA在哺乳动物进化及人类***发生和发展中作用的日益关注,lncRNA调控机制已成为当前遗传学研究的热点问题。
筛选出差异表达的lncRNA是研究其在人类***发生中所扮演角色的基础。富衡生物为用户提供高通量的lncRNA芯片进行lncRNA表达谱分析,该芯片基于Agilent的SurePrint技术生产,大分子生物检测服务,实验稳定可靠。
技术优势
信息覆盖广泛:覆盖了多个quan威lncRNA数据库发布的数据;提供人,小鼠,大鼠的lncRNA检测。
lncRNA和mRNA同时检测:芯片上包含有的lncRNA和新的mRNA序列检测探针。一次芯片实验可同时对lncRNA和mRNA进行分析。
平台成熟可靠:采用Agilent原位喷墨合成技术,了高检测灵敏度和特异性。
数据分析:提供lncRNA和mRNA表达谱差异分析和功能分析,以及二者的关联分析。
蛋白提取
大部分蛋白质都可溶于水、稀盐、稀酸或碱溶液, 少数与脂类结合的蛋白质则溶于乙醇、丁醇等有ji溶剂中,因些,分子生物检测***,可 采用不同溶剂提取分离和纯化蛋白质及酶。
(一)水溶液提取法
稀盐和缓冲系统的水溶液对蛋白质稳定性好、溶解度大、是提取蛋白质常用的溶剂,通常用量是原材料体积的1-5倍,提取时需要均匀的搅拌,以利于蛋白质的溶解。提取的温度要视有效成份性质而定。一方面,多数蛋白质的溶解度随着温度的升高而增大,分子生物检测技术比较好,因此,温度高利于溶 解,缩短提取时间。但另一方面. ,温度升高会使蛋白质变性失活,因此,基于这一点考虑提取蛋白质和酶时一般采用低温( 5度以下)操作。为了避免蛋白质提以过程中的降解,可加入蛋白 水解酶抑zhi剂(如二yi丙基氟磷酸,碘yi酸等)。
全转录组测序
全转录组是指特定***或细胞在特定状态下所有转录产物的总和,包括mRNA和各种noncoding RNA。我们知道生物体本身的转录过程是一个动态变化且十分复杂的分子作用网络,如果只是对某个单一RNA分子的研究,有时并不能准确的发现分子作用机制。而竞争性内源RNA(ceRNA)理论阐述了一种全新的转录调控模式:ceRNA(包括lncRNA、circRNA、mRNA、假***等)分子能够通过miRNA应答元件(microRNA Respe Element, MRE)竞争性地结合相同的miRNA来调节彼此的表达水平。举个例子:miRNA会导致***沉默现象发生,而如果lncRNA竞争性结合了miRNA,从而影响了miRNA***沉默功能实现。
ceRNA是目前转录调控领域的热点内容之一,通过全转录组研究能够系统性的阐述ceRNA的分子作用机制。目前对全转录组简便的方法就是构建2个测序文库分别进行测序。标准的生物信息学分析能够得到mRNA、lncRNA、circRNA、miRNA各自的研究内容,靶向调控网络、ceRNA网络、共表达网络分析可以将这几种RNA联合起来分析,从而发现新的调控网络模型。去除rRNA的链特异性文库,含有的RNA信息含量十分丰富,通过测序和生物信息学分析能够得到mRNA、lncRNA、circRNA的鉴定及注释信息。不过该文库构建时会进行片段化选择从而滤掉了***all RNA的信息,所以需要另外再构建一个***all RNA文库,进行测序分析后可以得到miRNA和其他***all RNA的鉴定及注释信息。全转录组测序方案路线图如下所示:
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