透射电镜观察自噬小体方法

利用光学显微镜，借助相应的染色方法，可以观察细胞凋亡时会出现的一系列形态特征。常用的染色法包括台盼蓝、橙 / 化乙啶（AO/EB）、Giemsa 和 HE 法等。在光学显微镜下可以观察到核固缩、质浓缩和凋亡小体等典型的凋亡现象。

电镜形态学观察法是一种比较经典、可靠的方法，细胞实验外包哪里做的好，被认为是确定细胞凋亡的金标准。电镜下凋亡细胞表现为染色质凝集、核浓缩、核裂解、胞浆收缩和胞膜具有发泡现象及凋亡小体出现等。

血管生成技术

一、服务介绍

zhong瘤血管生成是一个极其复杂的过程，一般包括包括血管内皮基质降解、内皮细胞移行、内皮细胞增殖、内皮细胞管道化分支形成血管环和形成新的基底膜等步骤。由于zhong瘤***这种新生血管结构及功能异常，且血管基质不完善，这种微血管容易发生渗漏，因此肿liu细胞不需经过复杂的侵袭过程而直接穿透到血管内进入血流并在远隔部位形成转移。

血管生成（Angiogenesis）是指源于已存在的mao细血管和毛xi血管后微静脉新的mao细血管性血管的生长。无论原发性zhong瘤还是继发性zhong瘤，动物细胞实验外包，一旦生长直径超过1~2 mm，都会有血管生成。这是由于zhongt瘤细胞自身可分泌多种生长因子，诱导血管生成。

大鼠shen小球内皮细胞分离培养

2.原代细胞培养:(1)shen脏原位灌洗:SD大鼠用25%乌拉坦腹整***麻***后仰卧固定。胸腹部消森并分离胸主动脉，以无菌的冷Hank液漱朱洗血.同时剪破shen静脉利于液体流出。1-2min后shen脏色泽变白，南京细胞实验外包，取出双shen冰浴保存。

(2)shen小球分离:参照Green等方法改进。将灌洗后的shen脏撕下shen被膜.去除髓质后将皮质剪成约1-2mm'的碎块，轻碾shen皮质依次通过80.120和200目钢筛。收集shen小球。

(3)shen小球消化和培养；将提取的shen小球加人0.1% IN 型胶原酶消化后收集沉淀。以2x10* 的shen小球数接种于铺有1%明胶培养瓶内，加A配制好的内皮细胞培养液(MFM.Hepes 20 mmnoVL 20%胎牛xue清0. 66 U胰岛素/ml.血管内皮生长因子20 ng /ml、肝素钠100 u/ml.青莓su100 U/ml、链霉su100 μ/ml) .静止培养3 d后逐日观察shen小球的贴壁情况。待shen小球充分贴壁后常规换液.第3同进行纯化。

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