***系统模型制作蛋白水平「在线咨询」
作者:英瀚斯2020/10/25 5:41:36






动物模型的设计原则


重复性

理想的动物模型应该是可重复的,甚至是可以标准化的。例如用一次定量放血法可造成出血,会si亡,这就符合可重复性和达到了标准化要求。又如用狗做xin肌梗死模型照理很合适,因为它的冠状动脉循环与人相似,而且在实验动物中它适宜做暴露心脏的剖胸***,但狗结扎冠状动脉的后果差异太大,不同狗同一动脉同一部位的结扎,其后果很不一致,无法预测,无法标准化。相反,大小白鼠、地鼠和豚鼠结扎冠脉的后果就比较稳定一致,可以预测,因而可以标准化。






实验动物的选择

小鼠

小鼠性情较温顺,一般不会咬人,比较容易抓取固定。通常用右手提起小鼠尾巴将其放在鼠笼盖或其它粗糙表面上,在小鼠向前挣扎爬行时,用左手拇指和食指捏住其双耳及颈部皮肤,将小鼠置于左手掌心、无名指和小指夹其背部皮肤和尾部,即可将小鼠固定。在一些特殊的实验中,如进行尾静脉***时,可使用特殊的固定装置进行固定,如尾静脉***架或粗的玻璃试管。如要进行***或心脏采血应先ma醉再操作,如进行解剖实验则必须先无痛处死后再进行。



膀胱原位***模型方法

分组及处理雌性C57BL/6小鼠150只,随机.分成A(膀胱粘膜未预处理组).B(膀胱粘膜预处理表浅模型观察组),C(膀胱粘膜预处理丝lie霉su治liao组)、D(膀胱粘膜预处理PBSzhi疗对照组)和E(膀胱粘膜预处理不zhi疗生存期观察组)5组,每组30只。在灌注MB49膀胱ai细胞前,其中A组不进行预处理,B、C、D和E组则对膀胱粘膜进行预处理。在灌注MB49膀胱ai细胞后,A组不作任何处理;B组在灌注后第7天始每隔3d处死3只解剖观察膀胱肿liu生长情况及有无转移,并取qi官***(膀胱、shen、输尿管.心、肝、肺、脾)做病理切片(HE和免yi组化染色);C组在灌注后di1天开始给予si裂mei素(0.05 mg/ml)0.1 m'膀胱灌注zhi疗,每隔3d1次,连续6次;D组灌注后di1天开始给予PBS膀胱灌注,每隔3dl次,连续6次;E组不作处理。所有小鼠观察- - 般情况(精神状态、饮食、体质量等)zhong瘤生长情况(是否成瘤.肿liu大小.有无血尿、远处转移等)和生存期,并对si亡小鼠进行解剖,留取膀胱.shen、输尿管、心、肝、肺、脾等***用4%福er马林固定(C.D组小鼠膀胱固定前称重)。灌注后第60天,处死A.C.D和E组未si亡小鼠,解剖并留取膀胱.shen、输尿管、心、肝、肺、脾等***用4%福er马林固定,C、D.E组小鼠膀胱固定前称质量,








前lie腺素E2对大鼠巨噬细胞株NR8383 合成血管内皮生长因子促进人脐静脉血管内皮细胞成管、迁移的影响

  方法:分别采用0.1 nmol/L PGE2、1 nmol/L PGE2、1 nmol/L PGE2 10 nmol/L EP2受体抑zhi剂AH6809 10 nmol/L EP4受体抑zhi剂AH23848 处理的NR8383 细胞作为各实验组,选择未经PGE2以及其特异性受体抑zhi剂处理的NR8383 细胞作为对照组,采用Western blot 和qPCR方法检测各组NR8383细胞内VEGF蛋白以及mRNA的表达水平;收集以上各处理组的细胞培养上清液分别刺激1HUVECs,运用TRANSWELL 小室、Matrigel 胶细胞成管实验等实验方法,观察PGE2调控巨噬细胞对HUVEC 迁移效应和成管能力的影响。

  结果:随着NR8383 细胞培养液中加入PGE2浓度增gao,其 VEGF蛋白表达和VEGF mRNA的表达水平显著升高(Plt;0.05);0.1 nmol/L、1 nmol/L PGE2处理过的NR8383细胞培养上清液可以显著增加HUVEC细胞形成的小管面积,形成小管面积随着PGE2处理浓度的增加而增加(Plt;0.05);HUVECs的迁移运动也随着PGE2处理浓度的升高不同程度的增强,HUVECs趋化的数量显著升高(Plt;0.05);研究发现PGE2特异性的EP2/EP4 受体拮抗剂AH6809/AH23848,可以显著***PGE2 增强NR8383 细胞内VEGF mRNAs 表达的作用并且也显著***PGE2 增强 NR8383细胞促进HUVECs成管和趋化能力的效应(Plt;0.05)。

 




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