(1) 根据试验要求，制备枯草黑色变种芽孢悬液和芽孢样片。

(2) 每次试验取 2 个菌片为一组，平放于无菌平皿内，勿重叠。加盖，分置于灭菌柜的各层，内、中、外不同部位。试验时，灭菌柜内片样本外，还应满载以模拟的常规处理物品。

(3) 关闭柜门，开启电源，按灭菌柜设计程序进行灭菌。灭菌完毕，取出平皿，将菌片取出接种于含 5.0ML 营养肉汤培养基试管中，置 37℃ 培养箱内作定性培养。72 H 后观察结果。

肉汤管混浊者表示有菌生长， 判为阳性; 肉汤管澄清者表示无菌生长， 继续培养至第 7 D， 若仍无菌生长，判为阴性。

对难以判定的肉汤管，取其中 0.2ML 悬液接种营养琼脂平板，用灭菌 L 棒涂佈均匀，置 37℃ 培养箱中培养。48 H 后涂片染色，在显微镜下观察菌落形态，或进一步做其他试验，以判断生长者是否为试验菌。若有非试验菌污染，大型微波干燥设备，应查找原因重新进行试验。

(4) 测试中，应同时设立定性和定量阳性对照组(菌片对照)与阴性对照组(培养基对照)。

(5) 定量阳性对照组，以同批试验用菌片放在室温下，待试验组灭菌接种后，立即将该菌片 2 片分别移入含 5.0ML PBS试管中，***干燥设备，各振荡 80次洗涤。进行活菌培养计数。

(6) 定性阳性对照组，以同批试验用菌片放在室温下，待试验组灭菌接种后，立即将试验菌片 2 片，分别接种于 5.0ML 营养肉汤培养基，放入培养箱中作定性培养，观察有***生长情况。

(7) 阴性对照组，以空白样片 2 片，分别接种于 5.0ML 营养肉汤培养基，同时将未接种过的营养肉汤培养基放入培养箱中作定性培养，葫芦岛干燥设备，观察有无***生长。

(8) 试验重复 5 次。

(9) 在 5 次试验中，每次试验中阳性对照菌片的回收菌量均应达5×`10^5` CFU/片～5×`10^6`CFU/片；定性阳性对照组，***生长良好；阴性对照应无菌生长。阳性或阴性对照若有不符合上述要求的结果，试验作废，重新进行。

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