三维细胞培养技术有着重要的应用,普通的细胞培养由于细胞在体外改变的环境下逐渐丧失了原有的性状,往往和体内情况不相符,而动物实验完全在体内进行, 但由于体内的多种因素制约以及体内和外界环境相互影响而变得复杂化, 难以研究单一过程,且难以研究中间过程。三维细胞培养技术是介于单层细胞培养与动物实验之间的一种技术,既能1大程度的模拟体内环境,又能展现细胞培养的直观性及条件可控性的优势。
1)三维细胞牵张应力加载刺激:对生长在三维状态下的细胞进行静态的 或者周期性的应力刺激
2)三维细胞培养:使用三维***细胞模具和三维细胞培养板可以进行三维细胞培养
3)三维细胞应力加载:通过应力加载系统和弧矩形加载平台对生长在三维环境下的细胞进行单轴向或者双轴向的静态或者周期性的应力加载实验
4)动力模拟实验:可建立特1制的各种模拟实验:心率模拟实验,步行模拟实验,跑动模拟实验和其他动力模拟实验
5)生物人工***构建:可构建长度达35mm的生物人工***
6)观察细胞应力下实时反映:使用显微镜实时观察细胞在三维状态下的反应
细胞传代的一般方法?
开始细胞传代前,RCCMAX安装调试,仔细检查细胞传代所需的仪器和***是否齐全:一般主要有:细胞(单层细胞,镜检适合)、培养液(MEM-0.2%LH 培养液或MEM 培养液或199 等适合细胞有要求的培养液)、灭活小牛血X清、庆大溶液(1 万单位)、7.5%NaHC03 溶液、0.25%胰蛋白酶、PBS 洗液。
用具:小方瓶(100m1)、克氏瓶、胶塞、吸管(10ml、1m1)、细胞吹打管(20 ml)(以上用具需经121℃至
少15 分钟高压灭菌)、C02 孵箱、超净台、倒置显微镜、4℃、—20℃冰箱
操作步骤:镜检细胞,挑选生长状态良好,RCCMAX维修,细胞界限清晰,RCCMAX升级安装,具有立体感,形态好无污染、无异常及可X疑病变细胞。配制细胞培养液:按以下配比配制MEM-0.2%LH 培养液100ml 内,加入灭活小牛血X清10m1,庆大溶液0.3m1,7.5%碳酸氢钠溶液3ml。(仅供一般参考)。消化细胞;先用PBS 洗液冲洗细胞表面1-2 次,每次10m1,弃去洗液,向细胞瓶内加入0.25%胰蛋白酶溶液,RCCMAX,每瓶1m1,细胞瓶平放,使消化液完全覆盖细胞表面。至细胞完全脱落到胰酶中。每瓶加入10m1 细胞培养液吹打分散细胞,按所需的传代比例分装于小方瓶(100m1)中,再加入10m1 细胞培养液重复吹打一次后分装,然后补加至所需培养量。加塞,置于37±1℃孵箱培养。约2~4 天成片。(由细胞接种浓度决定);填写传代记录。
本系统技术***性:
1)安全快速的扩增细胞
2)在细胞特异性基质中进行三维的细胞高密度培养
3)扩增并获得可用于治1疗的有活性的原代细胞
4)在控制分化状态的条件下扩增
5)向植入的一代细胞提供植入支架
6)长期培养分泌细胞
7)高1效生产重组蛋白和疫1苗
8)生产的糖蛋白
9)三维培养与机械力刺激有机结合
10)三维凝1胶压实自动测量与面积自动计算
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