污染途径 污染物，特别是微生物常通过下列途径进入培养体系，造成污染

1、空气：空气是微生物及尘埃颗粒传播的主要途径。空气流动性大，如果培养操作场地于外界隔离不严格或消毒不充分，外界不洁空气很容易进入造成污染。因此，培养设施不能设在通风场所。无菌操作应在净化台内进行，工作时要带口罩，以免因讲话、咳嗽等使外界污染进入操作面，造成污染。

2、器材：各种培养器皿、器械消毒不彻底和洗刷不干净导致污染，另外需要对培养箱进行定期消毒，防止形成污染

3、操作：实验操作无菌观念不强，技术不熟练，使用污染的器皿或封瓶不严等，都可以造成污染。培养两种细胞以上时，操作不规范，交叉使用吸管或培养液、瓶等有可能导致细胞交叉污染。

4、血1清：有些血1清在生产时就已经被支原体或病毒等污染，变成了污染。

5、***样本：原代培养的污染多数来源于***样本；取材时碘酒消毒后脱碘不彻底，可造成碘混入***，细胞或培养液中，影响细胞细胞生长。

RCCS生物反应器有什么不同的应用？

RCCS生物反应器的初目的是模仿微重力。在使用这台反应器用于地面实验期间，我们发现这些反应器中的细胞形成3D聚合体。从那以后，这些RCCS生物反应器被用于细胞和***培养的几个领域。 RCCS生物反应器的应用范围从基础细胞生物学到航天生物学，培养以及再生***和开发，在将来，也许应用于***的和损伤治1疗。对于RCCS生物反应器的各种各样应用的详细说明。

美国Synthecon赛斯康RCCS-1H单转头微重力三维细胞培养系统

细胞传代的一般方法？

开始细胞传代前，仔细检查细胞传代所需的仪器和***是否齐全：一般主要有：细胞(单层细胞，镜检适合)、培养液(MEM-0.2%LH 培养液或MEM 培养液或199 等适合细胞有要求的培养液)、灭活小牛血X清、庆大溶液（1 万单位）、7.5％NaHC03 溶液、0.25％胰蛋白酶、PBS 洗液。

用具：小方瓶(100m1)、克氏瓶、胶塞、吸管(10ml、1m1）、细胞吹打管（20 ml）(以上用具需经121℃至

少15 分钟高压灭菌)、C02 孵箱、超净台、倒置显微镜、4℃、—20℃冰箱

操作步骤：镜检细胞，挑选生长状态良好，细胞界限清晰，具有立体感，形态好无污染、无异常及可X疑病变细胞。配制细胞培养液：按以下配比配制MEM-0.2%LH 培养液100ml 内，加入灭活小牛血X清10m1，庆大溶液0.3m1，7.5%碳酸氢钠溶液3ml。（仅供一般参考）。消化细胞；先用PBS 洗液冲洗细胞表面1-2 次，每次10m1，弃去洗液，向细胞瓶内加入0.25％胰蛋白酶溶液，每瓶1m1，细胞瓶平放，使消化液完全覆盖细胞表面。至细胞完全脱落到胰酶中。每瓶加入10m1 细胞培养液吹打分散细胞，按所需的传代比例分装于小方瓶(100m1)中，再加入10m1 细胞培养液重复吹打一次后分装，然后补加至所需培养量。加塞，置于37±1℃孵箱培养。约2～4 天成片。(由细胞接种浓度决定)；填写传代记录。

美国Synthecon赛斯康RCCS-4HD微重力四转头三维细胞培养仪

细胞培养常见问题：细胞冷冻管解冻培养时， 是否应马上去除DMSO？

除少数特别注明对DMSO 敏感之细胞外， 绝大部分细胞株（包括悬浮性细胞）， 在解冻之后， 应直接放入含有10-15ml新鲜培养基之培养角瓶中， 待隔天再置换新鲜培养基以去除DMSO 即可， 如此可避免大部分解冻后细胞无法生长或贴附之问题。

1 品 名: RCCS‐4HD 重复使用三维细胞培养系统/***4转头,每2只为一组，每组***控制

2 标 配: 主机座X1，控制器X1，说明书X1，培养容器4pcs(一次性及可重复用培养容器均可用)

3 说 明:

3.1 可重复是指培养容器除可以通过射线灭菌外，还可以通过高温、高压灭菌处理，且培养容器前端盖可以拆解打开，以便于获取培养产物及清洁、***；

3.2 适配一次性培养容器、可重复培养容器以及STLV培养容器等所有规格培养容器；

3.3 通过使用不同规格的培养容器，可实现各种细胞培养、***培养（含骨***）以及支架培养、微载体培养等；

3.4 同时多可培养4组样品，根据细胞生长不同需求，可每两组***控制转速；