自主研发用时,引物设计需注意!
核酸试纸条三明治夹心检验法探针设计:在上下游引物中间设计一条长度为46-52nt与目的片段互补序列;5’端修饰一个抗原标记(典型FAM);5’端和3’端中间位置标记一个dSpacer(THF);3’端标记一个修饰基团,如胺基、生物素或C3-Spacer,同时要求下游引物5’端标记一个修饰基团。
该方法极其适用于现场核酸检测。可应用于初筛、食品安全、宠物***检测等各种不具备完整分子检测条件下的核酸测试。对操作人员***水平要求低,检测结果可信度高。
安普未来的解决方案操作十分简单
1核酸提取
直接取咽拭子等样品放入管A中(含裂解液,可灭活病毒);
管A放入95℃-100℃水浴或者金属浴10分钟;2扩增反应
向含有冻干***(冻干***包含了生物酶与各反应组分;可常温运输,便捷)的反应管中加入42.5 μL R buffer使其复溶;
取核酸提取步骤中提取完成的样本3-5μL 加入反应管;
然后在反应管加入2.5μL启动B buffer,盖上盖充分混匀后上机反应。反应温度为42℃,时长20min,实时显示荧光扩增曲线。其结果分析与荧光定量PCR类似,简单易懂。
多酶恒温快速扩增技术在大动物分子诊断领域的应用
————MIRA助力猪疫病的检测
2018年10月开始的非洲猪疫情,很大的冲击了中国生猪养殖市场和屠宰市场。造成了市场格局的大幅变化,也提升了***和民众对畜牧养殖的认识和重视,从简单的关注食品安全开始向关注食材原料安全转移。随着疫情的逐渐缓和,疫情的检测主体已经从生猪检测向环境监控转化。例如,厂区周边取样、运送生猪的车辆取样、进出人员的衣物取样等。这些预防性检测已占据养殖场日常检测量的80%以上,因此对养殖过程中诊断提出了更高的要求,需要便携、快捷、易操作、便于临场检测的新技术,而传统PCR检测技术存在检测时间长、人员技术要求高和设备昂贵等特点,在实际应用上,越来越不适合畜牧养殖等非***区域的检测需求。而我司的MIRA技术恰恰可以弥补上述缺陷。MIRA多酶恒温快速扩增技术,模仿细胞内核酸过程,在体外、常温、恒温的状态下实现核酸的指数式扩增。其核心就是利用多酶系统替代以往利用精密温控设备(PCR仪)才能完成的变性、退火、延伸等流程。
多酶恒温快速扩增技术具有以下特点
1、检测精度更高,本技术检测目标为核酸,灵敏度可以达到10个拷贝的数量级;2、“小、快、非***操作”,本技术对应的仪器其小而便捷,对操作技能要求不高,检测时间短(5-15分钟可判定检测样本的阴阳性),可广泛用于野外、兽医站、养殖基地等场景。3、果判读的方式也多种多样:凝胶电泳型、荧光定量型和胶体金试纸条型。本技术能够实现在动物疫病检测领域中即时检测的要求,满足了养殖业转型升级对现代兽医服务的迫切需求,为动物疫病防控工作以及现代养殖业的可持续发展保驾护航。
同时,安普未来也提供可自主开发的科研类***,通过指导使用者自行设计引物与探针,从而令广大用户均可实现自主开发分子快速检测***,实现20分钟内完成核酸扩增、判读结果。
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