荧光显微镜概述

反光镜

反光镜的反光层一般是镀铝的，因为铝对紫外光和可见光的蓝紫区吸收少，反射达90%以上，而银的反射只有70%;一般使用平面反光镜。

目镜

在荧光显微镜中多用低倍目镜，如5×和6.3×。过去多用单筒目镜，因为其亮度比双筒目镜高一倍以上，但研究型荧光显微镜多用双筒目镜，观察很方便。

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荧光显微镜的标本制作要求

1、载玻片

载玻片厚度应在0.8~1.2mm之间，太厚的坡片， 一方面光吸收多，另一方面不能使激发光在标本上聚集。载玻片必须光洁，厚度均匀，无明显自发荧光。有时需用石英玻璃载玻片。

2、盖玻片

盖玻片厚度在0.17mm左右，光洁。为了加强激发光 ，也可用干涉盖玻片，这是一种表面镀有若干层对不同波长的光起到不同干涉作用的物质(如氟化镁)的盖玻片，它可以使荧光顺利通过，而反射激发光，这种反射的激发光可激发标本。

3、标本

***切片或其他标本不能太厚，若太厚激发光大部分消耗在标本下部，而物镜直接观察到的上部不充分激发。另外，细胞重叠或杂质掩盖，影响判断。

4、封裱剂

封裱剂常用甘油，必须无自发荧光，无色透明，荧光的亮度在pH8.5~9.5时较亮，不易很快褪去 。

5、镜油

一般暗视野荧光显微镜和用油镜观察标本时，必须使用镜油，尽量使用无荧光镜油，也可用上述甘油代替，液体石蜡也可用，只是折光率较低，对图像质量略有影响。

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荧光显微镜的使用方法

以下内容由老上光仪器厂为您提供，今天我们来分享荧光显微镜的相关内容，希望对同行业的朋友有所帮助！

(1)打开灯源，超高压灯要预热15min才能达到高的亮点。

(2)透射式荧光显微镜需在光源与暗视野聚光器之间装上所要求的激发滤片，在物镜的后面装上相应的压制滤片。落射式荧光显微镜需在光路的插槽中插入所要求的激发滤片、双色束分离器、压制滤片的插块。

(3)用低倍镜观察，根据不同型号荧光显微镜的调节装置，调整光源中心，使其位于整个照明光斑的***。

(4)放置标本片，调焦后即可观察。使用中应注意:未装滤光片不要用眼直接观察，以免引起眼的损伤;用油镜观察标本时，必须用无荧光的特殊镜油;高压灯关闭后不能立即重新打开，需待灯完全冷却后才能再启动，否则会不稳定，影响灯寿命。

(5)观察。例如:在荧光显微镜下用蓝紫光滤光片，观察到经0.01%荧光染料染色的细胞，细胞核和细胞质被激发产生两种不同颜色的荧光(暗绿色和橙红色)。