什么是荧光显微镜?
荧光显微镜也是光学显微镜的一种,主要的区别是二者的激发波长不同。由此决定了荧光显微镜与普通光学显微镜结构和使用方法上的不同。
荧光显微镜是荧光细胞化学的基本工具。它是由光源、滤板系统和光学系统等主要部件组成。是利用一定波长的光激发标本发射荧光,通过物镜和目镜系统放大以观察标本的荧光图像。
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荧光显微镜的工作原理
光源多采用200W的超高压灯作光源,它是用石英玻璃制作,中间呈球形,工作时由两个电极间放电,引起蒸发,球内气压迅速升高,当完全蒸发时,可达50~70个标准大气压力,这一过程一般约需5~15min。超高压灯的发光是电极间放电使分子不断解离和还原过程中发射光量子的结果。它发射很强的紫外和蓝紫光,足以激发各类荧光物质,因此,为荧光显微镜普遍采用。
超高压灯也散发大量热能。因此,灯室必须有良好的散热条件,工作环境温度不宜太高。
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荧光显微镜的光源
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新型超高压灯在使用初期不需高电压即可引燃,使用一些时间后,则需要高压启动(约为15000V),启动后,维持工作电压一般为50~60V,工作电流约4A左右。200W超高压灯的平均寿命,在每次使用2h的情况下约为200h,开动一次工作时间愈短,则寿命愈短,如开一次只工作20min,则寿命降低50%。因此,使用时尽量减少启动次数。灯泡在使用过程中,其光效是逐渐降低的。灯熄灭后要等待冷却才能重新启动。点燃灯泡后不可立即关闭,以免蒸发不完全而损坏电极,一般需要等15min。由于超高压灯压力很高,紫外线强烈,因此灯泡必须置灯室中方可点燃,以免伤害眼睛和发生炸裂。
荧光显微镜概述
反光镜
反光镜的反光层一般是镀铝的,因为铝对紫外光和可见光的蓝紫区吸收少,反射达90%以上,而银的反射只有70%;一般使用平面反光镜。
目镜
在荧光显微镜中多用低倍目镜,如5×和6.3×。过去多用单筒目镜,因为其亮度比双筒目镜高一倍以上,但研究型荧光显微镜多用双筒目镜,观察很方便。
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