如何鉴别荧光显微镜?
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荧光显微镜和普通显微镜有以下的区别:
1.照明方式通常为落射式,即光源通过物镜投射于样品上;
2.光源为紫外光,波长较短,分辨力率高于普通显微镜;
3.有两个特殊的滤光片,光源前的用以滤除可见光,目镜和物镜之间的用于滤除紫外线,用以保护人眼。
荧光显微镜的工作原理
光源多采用200W的超高压灯作光源,它是用石英玻璃制作,中间呈球形,工作时由两个电极间放电,引起蒸发,球内气压迅速升高,当完全蒸发时,可达50~70个标准大气压力,这一过程一般约需5~15min。超高压灯的发光是电极间放电使分子不断解离和还原过程中发射光量子的结果。它发射很强的紫外和蓝紫光,足以激发各类荧光物质,因此,为荧光显微镜普遍采用。
超高压灯也散发大量热能。因此,灯室必须有良好的散热条件,工作环境温度不宜太高。
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荧光显微镜的光源
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新型超高压灯在使用初期不需高电压即可引燃,使用一些时间后,则需要高压启动(约为15000V),启动后,维持工作电压一般为50~60V,工作电流约4A左右。200W超高压灯的平均寿命,在每次使用2h的情况下约为200h,开动一次工作时间愈短,则寿命愈短,如开一次只工作20min,则寿命降低50%。因此,使用时尽量减少启动次数。灯泡在使用过程中,其光效是逐渐降低的。灯熄灭后要等待冷却才能重新启动。点燃灯泡后不可立即关闭,以免蒸发不完全而损坏电极,一般需要等15min。由于超高压灯压力很高,紫外线强烈,因此灯泡必须置灯室中方可点燃,以免伤害眼睛和发生炸裂。
荧光显微镜——滤色系统
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激发滤板 根据光源和荧光色素的特点,可选用以下三类激发滤板,提供一定波长范围的激发光。
紫外光激发滤板:此滤板可使400nm以下的紫外光透过,阻挡400nm以上的可见光通过。
紫外蓝光激发滤板:此滤板可使300~450nm范围内的光通过。常用型号为ZB-2或ZB-3,外加BG-38。
紫蓝光激发滤板:它可使350~490nm的光通过。常用型号为QB24(BG12)。
大吸收峰在500nm以上者的荧光素(如罗达明色素)可用蓝绿滤板(如B-7)激发。
开始采用金属膜干涉滤板,由于针对性强,波长适当,因而激发效果比较玻璃滤更好。
激发滤板分薄厚两种,一般暗视野选用薄滤板,亮视野荧光显微镜可选用厚一些。
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