荧光显微镜的工作原理

光源多采用200W的超高压灯作光源，它是用石英玻璃制作，中间呈球形，工作时由两个电极间放电，引起蒸发，球内气压迅速升高，当完全蒸发时，可达50~70个标准大气压力，这一过程一般约需5~15min。超高压灯的发光是电极间放电使分子不断解离和还原过程中发射光量子的结果。它发射很强的紫外和蓝紫光，足以激发各类荧光物质，因此，为荧光显微镜普遍采用。

超高压灯也散发大量热能。因此，灯室必须有良好的散热条件，工作环境温度不宜太高。

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荧光显微镜的使用方法

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(1)打开灯源，超高压灯要预热15min才能达到高的亮点。

(2)透射式荧光显微镜需在光源与暗视野聚光器之间装上所要求的激发滤片，在物镜的后面装上相应的压制滤片。落射式荧光显微镜需在光路的插槽中插入所要求的激发滤片、双色束分离器、压制滤片的插块。

(3)用低倍镜观察，根据不同型号荧光显微镜的调节装置，调整光源中心，使其位于整个照明光斑的***。

(4)放置标本片，调焦后即可观察。使用中应注意:未装滤光片不要用眼直接观察，以免引起眼的损伤;用油镜观察标本时，必须用无荧光的特殊镜油;高压灯关闭后不能立即重新打开，需待灯完全冷却后才能再启动，否则会不稳定，影响灯寿命。

(5)观察。例如:在荧光显微镜下用蓝紫光滤光片，观察到经0.01%荧光染料染色的细胞，细胞核和细胞质被激发产生两种不同颜色的荧光(暗绿色和橙红色)。