SDS-PAGE电泳

蛋白质在SDS-PAGE电泳中，迁移率只和其分子量相关

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PAGE据其有无浓缩效应，分为连续系统与不连续系统，连续系统电泳体系中缓冲液pH值及凝胶浓度相同，带电颗粒在电场作用下，主要靠电荷及分子筛效应；不连续系统电泳体系中由于缓冲液离子成分、pH、凝胶浓度及电位梯度的不连续性，带电颗粒在电场中泳动不仅有电荷效应、分子筛效应，还具有浓缩效应，故分离效果更好。PAGE据其有无浓缩效应，分为连续系统与不连续系统，连续系统电泳体系中缓冲液pH值及凝胶浓度相同，带电颗粒在电场作用下，主要靠电荷及分子筛效应。不连续的凝胶作为支持介质，利用凝胶层的不连续性、缓冲液离子的不连续性、PH的不连续性及电位梯度的不连续性，使样品在不连续的两相间积聚浓缩成很薄的起始区带，然后进行分离。

核酸电泳凝胶的染色

核酸电泳凝胶的染色

凝胶的染色和观察 凝胶中核酸带的染色，常用***化乙锭法和银染法。前者与琼脂糖凝胶的染色方法相同。

银染法的灵敏度较高，可如下操作:

(1) 将凝胶置固定液(10%乙醇，0.5%冰醋酸)中固定10分钟;

(2) 双蒸水洗1-2次;

(3) 置0.01mol/L AgNO3溶液中，室温反应15-30分钟;

(4) 充分水洗;

(5) 置NaOH-甲醛混合液(200ml 3%NaOH，含1ml甲醛)中反应至条带显色清晰，本底适宜;

(6) 用5%冰醋酸终止反应。

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蛋白电泳槽的凝胶置入与电泳

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a，将控制夹板呈打开方式放置于干净平整桌面上

b，将首块凝胶三明治以薄玻璃板向内方式放置于凝胶支撑架上，凝胶支撑架模铸于组件底部且每侧均有两个，此时凝胶板相对中心有30 度夹角，放置首块胶时须小心确认控制夹板保持平衡状态不会翻倒，在另一侧凝胶支撑架上放置第二块胶，共有两块胶相对中心倾斜（注：凝胶板必须以薄玻璃板向内方式放置于控制夹板两侧，同时，控制夹板需要 2 块胶板组合形成功能组件，如果运行1 或 3 块胶时，须使用单胶堵板代替另一侧的凝胶）。不连续系统电泳体系中由于缓冲液离子成分、pH、凝胶浓度及电位梯度的不连续性，带电颗粒在电场中泳动不仅有电荷效应、分子筛效应，还具有浓缩效应，故分离效果更好。

c，用一只手轻轻将2块胶板推向中心靠紧绿色胶条，确保短玻璃板处在绿色胶条上部的凸起之下并压紧胶板，另一只手将控制夹板合拢在胶板上，使其锁定到位。

d，电泳槽下槽具有两个位置可放置两个电泳槽内芯：带插头电泳槽内芯在后，蘑菇头电泳槽内芯在前，如果只运行 2 块胶则只需用带插头电泳槽内芯，将其放在后部位置上使得红色正极与槽右侧的红色标记相对应，如需做 4 块胶，除放入带插头电泳槽内芯外，还要将蘑菇头电泳槽内芯放入前部位置，确认两者的红色正极与槽右侧的红色标记相对应（注意：位置和方向的错误会使上盖无法盖合）。以下是龙方科技为您一起分享的内容，龙方科技***生产电泳槽，欢迎新老客户莅临。

e，将上盖盖在电泳槽下槽上，确认插头位置正确（上盖上的障碍物可以防止***错误）。

f，将电泳槽导线的双插头认准正负极插入电泳电源插孔内，恒压 200V 是 SDS-PAGE 和多数 native PAGE 电泳的推荐条件。在 200V 电压条件下运行，SDS-PAGE 大约需要 35 分钟。

g，电泳完成后关断电源，拔出电源插头，移开上盖，小心取出电泳槽内芯，倒出缓冲液。为防止缓冲液漏洒，请在打开控制夹板前倒掉缓冲液。