转印电泳
转印电泳的分类及注意事项:
Western Blotting(蛋白质单项电泳后印迹转移)
Eastern Blotting(蛋白质双向电泳后印迹转移)
Southern Blotting(DNA印迹) Northern Blotting(RNA印迹)
在转印过程中要控制温度 ,在低温或者冷循环条件下进行
对于分子量大于100KD的蛋白质大分子不用半干转
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那么哪些地方可能会导致漏胶或者漏液这种问题呢?
那么哪些地方可能会导致漏胶或者漏液这种问题呢?
1. 玻璃板侧方或下方不小心因磕碰受损,这样玻璃板受损处则不再平整,液体会从这些部位漏出。这种情况下只能更换玻璃板,而很多垂直槽的玻璃板和边条压片是粘在一起的,这种情况则需要一起更换。
有时由于清洗不到位,边条压片表面会有污物凸起,也会导致两侧不能密闭夹紧而漏胶。
2. 两侧的夹扣变松,或有些厂家的夹扣为了防止漏液,设计的很紧,时间长之后,玻璃板被挤压变形,密封性下降。这样玻璃板也会从两侧漏胶。
3. 底座的胶垫老化、变形或错位,玻璃板底部会发生漏胶。
4. 桌面不平整,玻璃板上夹具时不容易放正,玻璃板安装到夹具上时是相对于底座橡胶垫倾斜的,这样玻璃板底部会发生漏胶。
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蛋白电泳
蛋白电泳
我们通常把“蛋白电泳”俗称为跑胶,如果按照这个字面意思来理解的话就是把蛋白质放在胶上跑,为啥要让蛋白质在胶上跑呢?4毫米)粘在槽内,以垫起凹下的密封条,使其与两边保持一致,此后再将密封条粘在槽内即可。我们提到的蛋白是总蛋白,也就是说细胞里所有(理论上)蛋白都在里头了,但是我们要检测的只是其中的一两种,所以我们得想办法把各种蛋白质分离开,借助的方法就是跑胶。与核酸电泳一样,蛋白质电泳也需要marker和loading buffer。与核酸电泳不一样的是,蛋白电泳(做WB时)的marker本身就是带有颜色的,在电泳过程中,我们可以清楚地看到marker上的每一个条带的位置,而核酸电泳的过程中我们是看不到marker的每一条带的,只有把胶经过核酸染料染色后,并且在紫外光下我们才能看到marker的条带。
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