影响电泳快慢的重要因素

影响电泳实验泳动速度的重要因素——支持物

电泳实验多在固体支持物上进行，使样品中的不同组分形成不同的区带，称区带电泳。电泳结束后，支持物可以方便地进行染色等后续处理。

对支持物的一般要求是均匀，吸附力和电渗小，机械性能好，便于染色或紫外光下检测。常用支持物有SDS——PAGE凝胶，琼脂糖凝胶、滤纸，醋酸纤维素薄膜等 ， 支持物性质不同也会影响泳动速率，如琼脂糖和聚酰胺凝胶都有大小不同的筛孔，在筛孔大的凝胶中溶质颗粒的泳动速率快，反之则慢。

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核酸电泳技术的应用

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琼脂糖凝胶电泳适合分离、纯化200bp-50kB长度的核酸片段，Western blot厂商，广泛应用于***组提取与分析、载体构建、质粒提取等方面，分辨率较低，相差100bp以内的核酸片段较难分离。聚丙烯酰胺凝胶电泳适合分离1kB以下的小核酸片段，适用于序列分析与比对、核酶分析与鉴定、小片段核酸的提取与分析等方面分辨率较高，可以精准分离相差十几至几十bp的小片段核酸分子。脉冲场凝胶电泳分离片段大小50kb-10Mb，可有效回收大片段DNA，是一种非常有效的分子分型方法，因此根据实验目的，选择相应的电泳方法，能得到可靠地实验结果。

琼脂糖水平电泳槽实验操作

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1. 根据电泳需要，配置合适浓度的电泳及制胶缓冲液。一般为 1× TAE或0.5×TBE。

注意：用于电泳的缓冲液和用于制胶的缓冲液必须是相同的。

2. 根据制胶量及凝胶浓度，Western blot公司，在加有一定量的电泳缓冲液的三角锥瓶中，加入准确称量的琼脂糖粉。

注意：总液体量不宜超过三角锥瓶的50%容量。

3. 在微波炉中加热溶解琼脂糖

注意：必须保证琼脂糖充分完全溶解，否则，会造成电泳图像模糊不清。加热时如胶液剧烈沸腾发泡，停止加热。微波炉中加热时间不宜过长。

4.使溶液冷却至60℃左右，如需要可在此时加入EB溶液使其终浓度为0.5ug/ml，并充分混匀（EB为***品，不提倡使用）。

注意：EB是一种致***物质。使用含有EB的溶液时，请戴用手套。EB在可见光下会分解。

5.将琼脂糖溶液倒入制胶托盘中，然后在适当位置处插上梳子。凝胶厚度一般在5－8 mm 之间。

注意：不要产生气泡，溶液温度太高(gt;60℃)，会使得水分

过分蒸发，改变凝胶离子浓度，影响电泳效果。

6.在室温下使胶凝固（大约30 分钟），Western blot，然后放置于电泳槽中进行电泳。

注意：凝胶不立即使用时，用保鲜膜将凝胶包好在4℃下保存，或者放在制胶的缓冲液中，一般可保存2～5 天。

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